胞外蛋白的检测方法.ppt

胞外蛋白的检测方法;内容提要;胞外蛋白(PN) ;胞外蛋白对污泥沉降性能的影响 ;胞外蛋白对重金属离子的吸附; 长春市南湖天然水环境中生物膜优势菌种胞外蛋白对镉的吸附特征及其影响因素。 结果表明, 胞外蛋白对镉的吸附过程符合Freundlich 热力学等温方程。;PN 的分析方法;0.22μm微滤膜过滤，去除PN提取液中的细胞;PN分析方法：分光光度法、化学发光法、紫外光度法、免疫分析法、高效液相色谱法、纳米粒子法、等离子体共振法、荧光光度法、共振瑞利散射光谱法、过渡金属羟基碎片法等。 目前应用最多的是分光光度法，其次就是荧光光度法。 ;PN的分光光度分析法;主要方法; （3）4-哇琳甲酸法(BCA)法：在碱性溶液中蛋白质把Cu2+还原为Cu+，Cu+与蛋白质形成紫红色络合物，最大吸收峰位于562nm处。该法灵敏度较高，检出限为0.02g/L，可定量测定0.5g/L的总蛋白质，但受葡??糖的干扰较大。 （4）染料结合法：（该法简便快速，应用较多） 染料分类： 酸性三苯甲烷类染料（考马斯亮蓝等）； 酸性占吨染料（藻红 ）； 羟基蒽醌类染料（茜素红S） 变色酸双偶氮染料（氯磺酚S等）。 考马斯亮蓝法是目前最常用的方法;考马斯亮蓝分光光度法; （3）标准蛋白溶液的配制：用长春生物制品研究所生产的人血白蛋白,采用凯氏定氮法测定蛋白含量,准确稀释成50ug/ml的标准蛋白溶液 （4）测定方法：取一定体积样品（含蛋白质15μg左右，蛋白含量较高的样品可适当稀释），补加蒸馏水至0.5ml，加入3.0ml染色液,摇匀,于室温放置3-5min，同时做清水空白试验，于595nm处测定吸收度,分别为As和A0，计算ΔA= As - A0 通过实验，验证了考马斯亮蓝法具有干扰少、简便、灵敏、准确等优点，而且重复性好。;PN 的荧光光度分析法;PN 荧光光度分析法 ;荧光光度分析法——染料法;染料法研究及应用 ;陈洪琪等利用阳离子荧光染料吖啶红与十二烷基磺酸钠体系检测牛血清白蛋白，检出限为0.06 mg/L。 沈含熙等改用吖啶橙做荧光探针，发现当蛋白质加入到吖啶橙非荧光二聚体溶液中，体系的荧光明显增加，测定牛血清白蛋白检出限为0.08 mg/L。 ;染料法注意事项;总结;与其他研究手段相比，生物大分子具有特异性、预警性和广泛实用性等特点，可以在分子水平阐述分子适应等生态问题的机制，有助于更好地揭示生物与环境之问的相互作用机制，为污染环境的生物修复提供理论依据。 蛋白质是生物体的结构和功能物质，生命的起源和生物的进化都与蛋白质的发展密不可分。蛋白质是基因表达的产物，参与生命体内的每一步反应和活动。生命运动是通过和依赖蛋白质来实现的，因此，蛋白质有着极其重要的生命科学意义。蛋白质的结构、功能及其定量分析都具有重要意义。