选修1生物技术实践PPT.ppt

实验1：大肠杆菌的培养和分离 设备及用品： 灭菌锅或高压锅、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈、直径90mm的培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有酒精棉球的广口瓶、镊子、有棉塞的试管（15mm×120mm）5支 实验材料： (1)50mlLB液体培养基：蛋白胨0.5g、酵母提取物0.25g、NaCl 0.5g、加水50ml。 (2)大肠杆菌菌种斜面 (3)空白斜面 实验步骤 (1) 灭菌：将配制好的50mlLB液体培养基和50mlLB液体培养基分别装入两个250ml 的三角瓶中，加上封口膜，用高压锅进行灭菌。 (2) 制平板：在酒精灯火焰旁将固体培养基分别倒在4个培养皿中，使培养基铺平皿底部，待凝，使之形成平面。 (3)接种扩大培养：靠近酒精灯火焰将大肠杆菌接种到三角烧瓶的液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养12h。 (4) 划线分离：将摇床上培养12h的菌液在固体培养基的平板上连续划线，然后将盖好的培养皿倒置，放在37℃恒温培养箱中进行培养。 (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。 单菌落 实验讨论实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理？ 实验完成后，所有接触过细菌的器皿都必须先高压灭菌后再洗涤，特别是培养基，有可能被有害菌体污染，在培养繁殖后，大量有害菌体影响人畜健康，也污染环境，因此必须高压灭菌。使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃。对于取样器的取样头，通常是灭菌后在超声波清洗器中加洗衣粉洗涤纶30 min ,再用清水洗净，仍可再用。封口膜也可再用。 第一部分?? 微生物的利用 平阳中学 生物组 高翔 平阳中学 生物组 高翔 实验1 大肠杆菌的培养和分离 基本 要求 1．进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。 2．进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。 发展 要求 说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。 教学要求 大肠杆菌 1、革兰氏阴性 2、异养兼性厌氧肠道杆菌 4、基因工程中被广泛应用 ①大肠杆菌质粒——载体 ②大肠杆菌——受体细胞 3、繁殖方式：二分裂 培养：LB液体培养基进行扩大培养 分离：LB固体平面培养基划线分离 灼烧灭菌 干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。 而培养皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 2、分装倒平板 ①操作环境：超净工作台。 ②操作前进行消毒：用酒精棉球擦拭桌面和手。 ③操作: 使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。 消毒 a.煮沸消毒法 b.巴氏消毒法（低温消毒法）:如牛奶的消毒 c.化学药剂消毒:酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等 d.紫外线消毒 方法 倒平板技术 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 5.如何判断培养基是无菌的？ 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 灭菌和消毒的比较 灭菌 消毒 概念 强烈的理化因素 较为温和的理化因素 方法 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂消毒 紫外线消毒 程度 杀死芽孢和孢子 不杀死芽孢和孢子 芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体。 芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。 当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。 3、接种扩大培养 接种环灭菌：灼烧灭菌 4、划线分离 倒置