柑桔衰退病的研究与控制.ppt

如何最大限度地降低病毒的浓度？ 六、柑桔脱毒技术的研究 病毒鉴定及检测技术 生物学鉴定 血清学鉴定 核酸分析 电镜检查法 六、柑桔脱毒技术的研究 生物学鉴定 植物病毒都有一定的寄主范围，并在某些寄主植物上表现特定的症状，这种能鉴别某种病毒的植物通常称为指示植物或鉴别寄主。有些鉴别寄主对病毒的侵染易产生枯斑，因此将产生枯斑的寄主也称为枯斑寄主 鉴别寄主可以是草本和木本植物。常用的接种方法包括汁液摩擦接种和嫁接传染 六、柑桔脱毒技术的研究 草本指示植物鉴定 植物种类：常用的有藜科、茄科、豆科、葫芦科 接种方法：汁液摩擦法，从待检植株上取一定的组织，包括叶片、花瓣、根或枝皮，加入2-5倍（V/W）的缓冲液，在低温条件下研磨，然后蘸取汁液在撒有金刚砂的供试指示植物叶片上轻轻摩擦，接种完毕立即用蒸馏水冲洗净叶片上残留的汁液。然后将指示植物放在22-28℃、半遮荫的条件下生长，定期观察并记录指示植物的症状反应 指示植物鉴定的原理　大多数植物病毒有一定的寄主范围， 通过接种这些病毒可在某些寄主植物上表现特定的症状，这 种能鉴别某种植物通常称为指示植物或鉴别寄主。 六、柑桔脱毒技术的研究 木本指示植物鉴定 常用木本指示植物 接种方法 汁液磨擦接种 嫁接接种 （1）双重芽接法 （2）双重切接法 （3）指示植物直接嫁接法 3.昆虫传毒鉴定法 选择敏感、专一的指示植物 保持最适环境条件 设正负对照 刀剪工具要消毒　 修剪，加速症状表现 六、柑桔脱毒技术的研究 树种 木本指示植物 鉴定主要病毒种类 柑柑 墨西哥来檬、酸橙、葡萄柚、甜橙 兰普来檬、香橼 腊斯克枳橙、特烙亚枳橙、卡里佐枳橙、厚皮来檬 香橼、得威特枳橙、温州蜜柑 邓肯葡萄柚、墨西哥来檬、甜橙、香橼 柑橘速退病毒 柑橘裂皮类病毒 柑橘碎叶病毒 温州蜜柑矮缩病毒 柑橘环斑病毒和鳞皮病毒 柑桔病毒鉴定常用木本指示植物 六、柑桔脱毒技术的研究 病毒双重芽接鉴定 病毒双重切接鉴定 六、柑桔脱毒技术的研究 酶联免疫吸附分析 （ Enzyme-linked Immuno-sorbent Assay，ELISA ） 直接法：即所用酶标抗体为病毒特异抗体，因此针对不同抗体需分别进行标记 间接法：所用酶标抗体为通用的市售抗体，如：羊抗兔酶标抗体、羊抗鼠酶标抗体等，因此无需对每一抗体进行标记 　具有检测灵敏度高、快速、简便、准确等优点，不需要提纯病毒，可在较短时间内检测大量样品。 六、柑桔脱毒技术的研究 电镜检查法 浸渍制膜法 吐水制膜法 超薄切片法 分子生物学方法检测 PCR RT－PCR 原位分子杂交 放射性标记探针　 非放射性标记探针等 六、柑桔脱毒技术的研究 华 中 农 业 大 学 Huazhong Agricultural University 双百课程 六、柑桔脱毒技术的研究 我国茎尖微芽嫁接脱毒技术发展历史 1980年，农业部在华中农业大学建立了柑桔研究所，在章文才教授的主持下，邀请国外专家来华讲学，传授西班牙无病毒良种脱毒技术，柑桔研究所研究人员进行柑桔茎尖微芽嫁接及无病毒良种繁育技术研究，该项目于1986年获农业部科技进步二等奖。 此后，华中农业大学柑桔研究所为全国柑桔主产区培养了大批技术骨干。； 1988至1991我校柑桔研究所与广西农垦局横向联合，培育了12个优良柑桔品种脱毒苗，为广西省无病毒柑桔推广起到了良好的示范作用。 迄今，从事过STG脱毒技术的老师和工作人员：章文才、万蜀渊、陈邦富、何农、王映红、姜玲等。 美国的柑橘良种繁育体系 美国的柑橘良种繁育体系由政府、大学、研究机构和种苗商等柑橘产业链的一系列环节组成，各个环节分工明确，互相配合、互相支持。 1.政府负责制定相关的计划CCPP（Citrus Cultivars Protection Program，柑橘品种保护计划） ； 2.科研部门和大学的研究机构负责柑橘种质资源的保存、新品种的选育、病毒病的监测和无病毒原种的生产； 3.种苗商负责苗木生产； 4.在经费方面，则是从多种渠道来筹集。 六、柑桔脱毒技术的研究 从外国或者外地引进的品种，都必须先栽种在隔离设施中观察和研究，脱毒之后才能进行其他的研究利用工作，如品种改良、繁殖或商业应用等等。如果经过严格的检验证明没有病毒病，就栽植在林可夫柑橘试验站（Lindcove Foundation Block）。 每年还邀请全国主要的柑橘育苗商和柑橘种植者来试验站，参观考察不同柑橘品种的结果特性和果实特点，推介优良品种，如果橘农或者种苗商觉得某些品种较好，就可以获得接穗。 美国的种苗商不能长期利用这批接穗进行育苗，最多只能利用2年，就必须重新购买接穗原种。每年，政府均会派人到注册苗圃检查，发