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AMP依赖的蛋白激酶叉头转录因子O3a信号通路及氧化应激介导紫铆因诱导人食管癌细胞凋亡作用的研究 　　[摘要] 目的 探讨紫铆因（Butein）诱导人食管癌EC109细胞凋亡的作用及AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）/叉头转录因子O3a（FOXO3a）信号通路、氧化应激在该过程中发挥的作用。 方法 常规培养EC109细胞，分别给予Butein处理，首先检测EC109细胞的活力、迁移能力、氧化应激水平及凋亡指标Caspase 3的活性。采用Western blot法检测细胞内AMPK、FOXO3a的磷酸化水平及凋亡调节蛋白Bim、Bcl2相关X蛋白（Bax）的表达水平。用Compound C阻断AMPK后检测相关指标。建立裸鼠皮下肿瘤模型，给予Butein和Compound C处理，检测裸鼠体重和肿瘤体积。 结果 Butein处理后，细胞活力下降（P 　　[关键词] 紫铆因；食管癌；AMP依赖的蛋白激酶；叉头蛋白转录因子O3a；氧化应激；凋亡 　　[中图分类号] R735.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）06（c）-0025-05 　　[Abstract] Objective To investigate the effects of Butein on esophagus cancer EC109 cells and the role of AMP-activated protein kinase （AMPK）/forkhead class box O3a （FOXO3a） and oxidative stress in this process. Methods EC109 cell was routine cultured and given Butein， the cell vitality， migration ability， cellular oxidative stress level of EC109 cell and Caspase 3 activity were detected. The AMPK， FOXO3 aphosphorylation level and the expressions of Bim and Bax were detected by Western blot. After Compound C inhibit AMPK， related indicators were detected. The nude mice tumor bearing model was made， Butein and Compound C were given， the weight and tumor volume of nude mice were detected. Results After Butein treatment， cell vitality reduced， the distance between cell boundaries increased， ROS concentration and NADPH oxidase activity increased， total GSH level and Caspase 3 activity reduced （P 　　1 材料和方法 　　1.1 实验材料 　　人食管癌EC109细胞系购自中科院上海细胞库。Butein、Compound C购自Sigma-Aldrich公司（美国）；抗p-FOXO3a抗体、抗FOXO3a抗体、抗Bim、抗Bax抗体购自Abcam公司（美国）；抗p-AMPK抗体、抗AMPK抗体购自cell signaling technology公司（美国）。裸鼠购自中国医学科学院实验动物中心，合格证号：SYXK（京）2013-0019。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养及细胞处理 食管癌EC109细胞在完全培养基中常规培养，并置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中。置于37℃细胞培养箱中贴壁24 h，待细胞密度达到80%左右时换成无血清培养基处理12 h，然后给予相应处理。 　　1.2.2 细胞活力检测 以每孔1×105的密度接种到96孔板。将细胞分为Control组、25 μmol/L But组、50 μmol/L But组。给予相应处理，CCK法检测细胞活力。Butein的浓度和处理时间参考其他肿瘤中Butein相关研究及前期预实验结果，50 μmol/L Butein对食管癌EC109细胞具有较为显著的杀伤作用[16]。 　　1.2.3 细胞迁移能力检测 在6孔板背面用Marker笔划3条横线，在孔内用200 μL的枪头划线。洗去漂浮细胞，继续