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HPLC法测定八角莲中3种活性成分含量的研究 　　摘要：目的建立用高效液相色谱法测定八角莲中槲皮素、鬼臼毒素、山柰素含量的方法，比较不同产地八角莲药材3种化合物的含量。方法色谱柱：Waters Sunfire C18柱（5 μm，46×150 mm）；流动相：甲醇-04%磷酸溶液（45：55）；流速：10 mL/min；检测波长：290 nm；进样量：10 μL；柱温30℃。结果槲皮素、鬼臼毒素、山柰素的线性范围分别为000973 μg-973 μg（r=09999）、001001 μg-1001 μg（r=09999）、000998 μg-998 μg（r=09999），平均回收率分别为9835%（RSD=26%）、10025%（RSD=23%）、10080%（RSD=27%）。结论该方法简便可行，重复性好，可用于同时测定八角莲药材中槲皮素、鬼臼毒素、山柰素3种成分的含量，为八角莲药材的质量控制提供依据。 　　关键词：八角莲；槲皮素；鬼臼毒素；山柰素；高效液相色谱法 　　中图分类号：R9272文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）07-0065-03 　　八角莲（Dysosma versipellis Hance MCheng）隶属于小檗科（Berberidaceae）八角莲属（Dysosma Woodson），为我国特有二级濒危保护植物，主要分布在四川、云南、广西和湖北神农架林区及周边地区[1-2]，其根和根茎入药，有清热解毒、化痰散结、祛瘀消肿之功效。用于治疗痈疖肿痛、毒蛇咬伤、风湿关节痛、半身不遂、气管炎、乙型肝炎等，也可做杀虫剂。其主要有效成分有木脂素类物质鬼臼毒素及其衍生物、黄酮类物质山柰素和槲皮素等。现代药理研究表明[3-6]，鬼臼毒素具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒和抗蛇毒等作用；黄酮类成分则在心血管系统、内分泌系统和抗肿瘤方面具有明显的药理作用。目前对八角莲中有效成分的含量测定研究仅限于鬼臼毒素，且对不同产地八角莲中鬼臼毒素、槲皮素、山柰素等三种有效成分的含量比较尚未见报道。本文采用高效液相色谱法同时测定八角莲中三种成分的方法，为客观评价八角莲药材质量提供了科学依据。 　　1仪器与试药 　　11仪器美国Agilent 1100高效液相色谱仪（四元泵、DAD检测器、自动进样器、在线真空脱气机、智能化柱温箱及化学工作站）；恒温水浴锅；梅特勒-托利多AG285电子天平。 　　12试药十二批八角莲药材由云南省药物研究所收集，经中国科学院昆明植物研究所李恒研究员鉴定为小檗科植物八角莲Dysosma versipellis（Hance）MCheng，见表1。 　　对照品槲皮素（批号：100081-200406，纯度973%）、鬼臼毒素（批号：111645-200301）、山柰素（批号：110861-200304）均由中国药品生物制品检定所提供；所用流动相甲醇、磷酸为色谱纯，处理样品的甲醇为分析纯，水为超纯水。 　　2方法与结果 　　21色谱条件色谱柱：Wasters Sunfire C18柱（5 μm，46×150 mm）；流动相：甲醇-04%磷酸溶液（45：55）；流速：10 mL/min；检测波长：290 nm；进样量：10 μL；柱温30℃，理论塔板按槲皮素计算不低于4000，在该色谱条件下，供试品、对照品分离较好，与其他杂质峰均能达到基线分离（见图1）。 　　22溶液的制备 　　221对照品溶液的制备精密称取对照品适量，加甲醇制成每1 mL中含槲皮素01 mg，鬼臼毒素01 mg，山柰素01 mg的溶液，作为对照品溶液。 　　222供试品溶液的制备取样品05 g（过4号筛），精密称定，置150 mL圆底烧瓶中，精密量取甲醇25 mL，称重，80℃水浴回流30 min，放至室温后，用甲醇补重，摇匀，用045 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。 　　23线性关系考察精密称取槲皮素1000 mg，鬼臼毒素1001 mg，山柰素998 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度分别为0973 mg/mL、1001 mg/mL、0998 mg/mL的混合标准品储备液。精密吸取此储备液逐级稀释，分别注入液相色谱仪中，以对照品含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线。得回归方程为：Y槲皮素=14109X+18353，r=09999；Y鬼臼毒素=4837X +9504，r=09999；Y山奈素=15916X+16558，r =09999。?Y果表明，在上述色谱条件下，槲皮素在000973μg～973μg，鬼臼毒素在001001μg～1001μg，山柰素在000998μg～998μg范围内呈良好的线性关系。 　　24准确度试验（加样回收试验）精密称取9份样品