BCB筛选后的绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的差异性分析.pdfVIP

第30卷第 5期 试验研究 BCB筛选后的绵羊卵母细胞中母源基因 mRNA表达量的差异性分析 王 静t一，石庆华 ，林嘉鹏z，陈 博 ．一，汪立芹 ，赵云程 ，黄俊成 (1．新疆农业大学农学院，乌鲁木齐 830052；2．新疆畜牧科学院农业部家畜繁育生物技术重点开 放实验室，新疆畜牧科学院生物技术中心，鸟鲁木齐 830000) 摘要：卵母细胞的胞质成熟对于受精后正常的胚胎发育是至关重要的，亮甲酚蓝染色液(BCB)能有效筛选 出 胞质成熟卵母细胞。为详细了解BCB筛选 出的不同质量绵羊卵母细胞 中母源基因mRNA的表达量的差异性 ， 从而证明BCB对绵羊卵母细胞筛选的可行性和可靠性，判断4种母源基因与卵母细胞的胞质成熟是否有关， 为哺乳动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育分子机理的研究提供参考。本实验将卵母细胞置于BCB染色液中， 细胞质着蓝色的为BCB+，没着蓝色的为BCB一；并利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因Gdf9(生长 分化因子一9)、Zarl(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)和Dnmtl(DNA 甲基化转移酶 1)在不同质量 绵羊卵母细胞中的mRNA含量。结果表明：BCB染色筛选后，阴性卵母细胞4种基因的mRNA表达量比阳性 高(P0．01)，这充分证明，BCB能有效筛选出胞质成熟度好的绵羊卵母细胞，这4种母源基因与卵母细胞的胞 质成熟有关。 关键词：BCB染色；母源基因；荧光实时定量PCR ExpressionofmRNA ofM aternalGenesin D ifferentOvineOocytesScreenedbyBCB WangJing ShiQing—hua，HuangJun-cheng2，etal (1．CollegeofAgricultureofXinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi830052；2．TheKeyLab．ofLivestockReproduction ＆BreedBiotechnologyofMOA，XinjiangAcademyofBiotechnologicalCenter，XinjiangAcademyofAnimalScience， Urumqi830000) Abstract：Th ecytoplasmicripenessof oocyteswasakeytonormalfetaldevelopmentafterthefertilization．Th ebrilliantcresyl blue(BCB)couldeffectivelyscreenoutthecytoplasmicripenessoocytes．ToinvestigatethefeasibilityandreliabilityofBCB inscreeningovineoocyteswithripecytoplasm inmolecularlevel，theexpressionofmRNAoffourmaternalgenesGdf9 (growthdifferentiationfactor一9)，Z (z)rg0tearrestfactor一1)，Mater(maternalantigenthatemb~orequires)，Dnmtl(DNA methyhransferase一1)inovineoocytesstainedwithBCBweredeterminedbyfluorescentquantitativeReal—timePCR．There— suhsshowedthatthemRNA expressionoffourmaternalgenesinoocyteswithnegativeBCBwashigherhtanthatwithposi- tireones(P0．01)，whichfullyprovedthatovineoocyteswithdifferentripecytoplasmcouldbeefficaciouslyscreenedoutby BCB，andthatithasrelationwithhtefourmaternalgenes． Ke