烟草内生细菌分离方法的优化研究-中国烟草学报.PDF

90 中国烟草学报　2014 年 2 月 第 20 卷 第 1 期 烟草内生细菌分离方法的优化研究 1,2 1 1 1 1 3 4 5 陈泽斌 ， ， ， ， ， ， ， 代方平 寸林江 李 陈艳芳 许石剑 方飞 黄杨 1 昆明学院农学院，云南省高校都市型现代农业工程研究中心，昆明 6502 14 ； 2 云南省烟草农业科学研究院，云南 玉溪 653 100 ； 3 黔西州烟草公司兴仁县分公司，贵州 兴仁 562300 ； 4 德宏州环境保护局，云南 芒市 678400 ； 5 无锡园林建设工程管理处，江苏 无锡 2 14072 摘　要：用研磨组织稀释分离法与表面消毒有效性评价相结合的方法确定了适宜烟草组织的表面消毒方法以及内生细菌分离培养 基。采用 1% 次氯酸钠浸泡 5 min ，再用 75% 酒精浸泡 2 分钟能够 100% 去除表面附生菌，并且分离得到更多的内生细菌。研究 比较了TSA 、NA 、PDA 、LB 四种常用的细菌分离培养基在分离烟草内生细菌中的差异，其中TSA 和 NA 培养基分离得到的内 生细菌数量较高，TSA 培养基从烟草根、茎、叶中分离出的内生细菌数量分别为5.18 log cfu/g.fw 、2.17 log cfu/g.fw 、4.69 log cfu/g.fw； NA 培养基分别为 5.01 log cfu/g.fw 、1.81 log cfu/g.fw 、4.93 log cfu/g.fw 。对分离得到的 127 株内生细菌进行 16S rDNA 序列测定 表明，TSA 和 NA 培养基分离得到的内生细菌种类最多，其中TSA 培养基分别从根、茎、叶中分离到 9、7、13 种内生细菌；其 次是 NA 培养基，分别从根、茎、叶中分离到 8、6、10 种内生细菌。结果表明，采用 TSA 和 NA 培养基分离烟草内生细菌，可 以达到较为理想的分离效果。 关键词：烟草；内生细菌；分离；优化 doi ：10.3969/j .issn.1004-5708.2014.01.017 中图分类号：TS414　　　文献标志码：A　　　文章编号：1004-5708 （2014 ）01-0090-06 Research on separation optimization of endophytic bacteria in tobacco 1,2 1 1 1 1 3 4 5 CHEN Z ebin , DAI Fangping , CUN Linjiang , LI Qi , CHEN Yanfang , XU Shijian , FAN G Fei , HUAN G Yang 1 Engineering Research Center for Urb an Modern Agriculture of Higher Education in Yunnan Province, Agriculture School, Kunming Univer sity, Kunming 6502 14 , China;