第二节气相色谱法.PPT

色谱保留值——定性的依据 组分在色谱柱中停留的数值，可用时间t来表示。 组分在固定相中溶解性能越好，或固定相的吸附性越强，在柱中滞留的时间越长，消耗的流动相体积越大。 固定相、流动相固定，条件一定时，组分的保留值是个定值。 t0与被测组分无关，因而t’R更合理地反映了物质在柱中的保留情况。 * 根据色谱图可得到的重要信息： （1）色谱峰个数 —判断样品中所含组分的最少个数 （2）色谱峰的位置即保留值 —进行定性分析 （3）色谱峰的h 、A —进行定量分析 （4）色谱峰的位置及峰的宽度 —可评价色谱柱效（分离效能） （5）色谱峰两峰间的距离 —可评价固定相或流动相选择是否合适 * 四、气相色谱的应用 一、定性分析 定性分析的任务是确定色谱图上各个峰代表什么物质。 1.利用保留值与已知物对照定性 （1）利用保留时间定性 在相同色谱条件下，将标准物和样品分别进样，两者保留值相同，可能为同一物质。 此方法要求操作条件稳定、一致，必须严格控制操作条件，尤其是流速。 * * （2）利用峰高增量定性 若样品复杂，流出峰距离太近，或操作条件不易控制，可将已知物加到样品中，混合进样，若被测组分峰高增加了，则可能含该已知物。 （3）利用双色谱系统定性 通过改变色谱条件来改变分离选择性，使不同物质显示不同保留值。例：选用极性差别较大的两种不同固定液来制备色谱柱，不同物质具有不同保留值 * 二、定量分析 气相色谱定量分析是根据检测器对溶质产生的响应信号与溶质的量成正比的原理，通过色谱图上的峰面积或峰高，计算样品中溶质的含量。 mi=fi Ai mi=fihi mi—被测组分i的质量，fi—比例系数 Ai、hi—被测组分的峰面积及峰高 * 2、定量方法 （1）归一化法 试样各组分都出峰，可用归一化法定量。 把所有出峰组分的含量之和当作100%的定量分析方法称为归一化法。 若样品中有几个组分，每个组分的量分解为m1 m2…mn，各组分含量总和为m，则组分的质量为mi,质量分数Wi为 * 优点：简便、准确、不需标准物，不必准确称量和准确进样，操作条件稍有变化对结果影响较少。 * （2）内标法 准确称取样品m（含mi被测组分） +准确称取纯物质作内标物ms 混合物→进样 被测组分 标样（内标物） * s s i i′ s i A f′ A f m m = s s i i s i A f′ A f′ m m = * 对内标物的要求： 1）内标物应是样品中不存在的纯物质。 2）内标物与被测物的峰尽量靠近，但又能完全分开，tR相差少。 优点：定量准确，操作条件不必严格控制，与进样量无关，被测组分和内标物出峰即可，适用于微量组分的测定，应用广泛。 缺点：每次测定都要准确称量样品和内标物。 * （3）外标法—标准曲线法 当样品中各组分不能完全流出，又没有合适内标物时，可采用此法。 将待测组分的纯物质配制不同浓度的标准系列，在相同操作条件下，定量进样，测各个峰的A或h ，绘制A—C曲线或h—C曲线。 * 在完全相同条件下，测待测样品，根据A待或h待，从曲线上查出待测组分含量。 优点：操作简单，计算方便，不用fi′。 缺点：要求准确进样，操作条件稳定。 A(h) C A待 C待 * 一、HPLC的概念、分类、特点及应用 1.概念：HPLC系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。 2.分类：根据分离机制不同，分为： 第三节 高效液相色谱法(HPLC) 液固吸附色谱 液液分配色谱 化学键合色谱 离子交换色谱 * 利用保留值作为定性参数； 利用在样品中加入对照品，通过峰值增高来确认； 利用LC-MS联用仪，通过被分离物的质谱图与谱 库的谱图对比来定性。 4.应用 高速、高效、高灵敏度、应用广泛（GC分析只占 有机物的20%，HPLC分析可占80%） 3.特点 * 二、高效液相色谱仪 输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 * * 其工作过程如下：首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。 * 1.输液系统 高压输液泵 恒流泵：在输送流动相过程中流量恒定。常用柱塞往复泵 双泵：为了克服流量的脉动。有串联式