纸基微孔阵列芯片比色法检测乳酸脱氢酶-分析化学.PDF

第42 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)　 研究报告 第9 期 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 2014 年9 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1276 ~1280 DOI:10.11895/j.issn.0253-3820.140331 纸基微孔阵列芯片比色法检测乳酸脱氢酶 1,2 1 ∗1 1 张慧妍 　 张珍　 吉邢虎 　 何治柯 1(生物医学分析化学教育部重点实验室,武汉大学化学与分子科学学院,武汉430072) 2(核工业北京化工冶金研究院,北京 101149) 摘　 要　 利用纸基微芯片便捷、直观的优势,采用吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)/ 氯化硝基四氮唑蓝(NBT)显色 体系,借助凝胶成像仪和普通照相机两种成像方式,建立了纸基微孔阵列芯片比色法检测乳酸脱氢酶(LDH) 的方法。 在最佳实验条件下,显色强度与LDH浓度呈线性相关。 采用凝胶成像仪检测时,线性范围为 10 = ~150 U/ L,检出限(3σ)为9.44 U/ L(n 18)。 采用照相法获得的线性范围为 15 ~150 U/ L,检出限(3σ) = 为12.36 U/ L(n 18)。 实验表明,人血清白蛋白(HSA)对显色结果具有增强作用,探讨了HSA 的增色作用, 并以HSA为增强试剂得到工作曲线。 基于纸基微孔阵列芯片的LDH活性测定方法具有操作简单、结果直观 可见、灵敏度高等优点,对于脱氢酶类的便捷检测有一定参考价值,可望在生物医疗检测领域获得应用。 关键词　 乳酸脱氢酶;人血清白蛋白;纸基微孔阵列芯片;比色法 1　 引　 言 纸基微流控芯片是一种以纸张为基质的新型微流控分析器件,利用特定材料在纸上构建疏水栅 栏[1~4] ,将液体流限制在亲水区域,实现流体的复杂调控及分析检测等功能。 纸基微芯片试样和试剂消 耗少、分析速度快,操作简单,某些情况下可替代玻璃以及高聚物芯片进行现场分析检测[5~9]。 纸基微 芯片以纸为基质,不仅生物相容性好[10,11] ,可与多种检测方法兼容[12,13] ,而且价格低廉,用完即可丢 [14] 弃,因此,纸基微芯片已成为一种备受关注的廉价检测技术平台 。 乳酸脱氢酶(LDH)是临床酶学中经常测定的指标,作为一种工具酶,LDH水平可作为有关器官正 常与否的特异性生化指标,因此,血清中LDH活性的测定在疾病诊断中具有重要的临床意义。 常用的 [15] [16] [17] [18] LDH活性测定方法有化学发光法 、生物发光法 、微热量测量法 、荧光分析法 、毛细管电泳 [19] 法 等,但通常由于部分检测仪器价格较高,或是缺乏熟练的操作人员,使得一些检测技术在偏远或贫 困地区难以使用。 纸基微芯片致力于为民众提供廉价、便捷的检测平台,减少复杂仪器、装置的使 [20] 用 。 显色法可以提供直观可见的结果,不需专业分析人员就可以依照标准品对检测结果做出判断, 使偏远、贫困或者资源匮乏地区的个人诊断成为可能[21~23]。 本研究基于纸基微孔阵列芯片显色法检测 LDH,采用凝胶成像仪和普通照相机两种方法记录结果,为LDH 的灵敏检测提供了一种快速、直观、便 捷的分析手段。 2　 实验部分 2.1　 仪器与试剂 G-17光刻机(成都鑫南光机械设备有限公司),KW-4H-350烤胶机(上海凯美特功能陶瓷技术有限 公司),PB-10酸度计(北京