流式细胞仪技术PPT.ppt

流式细胞术 Flow Cytometry（FCM）;概 述;流式细胞仪技术在医学与生物学中的应用 ;FCM基本结构;FCM结构图;2. 液流系统;流动室;提 要;1 流式细胞仪使用的基本知识; FSC和SSC的原理;前向散射光;侧向散射光;血细胞双参数点图; ;常用荧光染料的特性;通道 发射波长 荧光颜色 FL1 530/30 绿色 FL2 585/42 橙色 FL3 650 橙红 FL4 661/16 红色 FL2 - Area FL2 - Width ;自发荧光的产生;消除非特异性结合-FcR阻断;对照的设置;激发光源与荧光标记物示意图;光谱重叠示意图;荧光补偿;;;光谱重叠的校正的示意图;多色荧光补偿的调节;设门的意义;细胞分选前后示意图;标本来源: 外周血、骨髓、培养细胞、组织(经尼龙网300目过滤) 制成单细胞悬液 标本浓度： 106/ml-外周血白细胞计数，白血病人血标本需PBS稀释 抗凝剂： EDTA、肝素-若抗凝不佳，有凝块，则不可检测。 溶血剂： 保持细胞形态、红细胞裂解完全。 反应温度： 26～27oC，室温避光。 细胞处理：;细胞处理：细胞固定和膜通透,抗体滴度;流式细胞仪检测的生物学意义;免疫细胞的鉴定及表型分析;白细胞簇分化抗原(Cluster Differentiation Antigen，CD)系统;Th1和Th2细胞;细胞周期的分析;食管癌细胞株的细胞周期;流式细胞仪检测在临床诊断的应用;FCM在临床细胞免疫学中的应用;T淋巴细胞的Th和Ts细胞亚群;NK细胞和B淋巴细胞亚群;细胞内细胞因子的测定 检测细胞因子对于临床上某些疾病的诊断和治疗具有重要的意义。其方法主要是通过细胞因子的特异性单克隆抗体进行细胞内免疫荧光染色,并结合膜表面抗原染色, 用多重染色FCM分析各种细胞内合成的细胞因子, 并根据各类细胞所产生的细胞因子种类的差别, 对免疫细胞进行分类, 如辅助性T细胞(Th1、Th2) 。因此，FCM 对活化免疫细胞内的细胞因子的检测，不仅能分析细胞因子的含量和产生细胞因子的不同细胞亚群,还能了解细胞内细胞因子产生的动力学机制。;细胞内细胞因子的意义;Th1/Th2细胞的检测及应用;FCM在临床血液学中的应用;急性B淋巴细胞性白血病;CD34+CD19+CD33-CD13-;CD34+CD33+CD13+型粒细胞性白血病;造血干细胞检测;细胞处理;CD34+阳性细胞绝对计数;FCM在临床肿瘤学中的应用;凋亡细胞;凋亡细胞流式细胞仪的分析方法;;;PI 染色原理;PI染色分析;DNA 断片的分析原理;;