流式多因子检测技术PPT.pptx

流式高通量多因子检测技术及应用 题纲I.多因子检测技术在生物医药研究中的应用 II. AimPlex多因子检测技术的原理和特质III.需具备什么样的实验条件，才能开展AimPlex检测工作？ VI. AimPlex产品应用 流式多因子检测技术在生物医药研究中的应用细胞因子与疾病免疫调节作用：调节着每个细胞乃至组织活动；直接参与了细胞间相互作用以及细胞外微环境的变化参与疾病发生：类风湿性关节炎； 强直性脊柱炎SLE； 银屑病； 细胞因子风暴以Th淋巴细胞为枢纽的细胞因子调节网细胞因子与疾病治疗多因子检测与疾病研究肿瘤生物学免疫相关干细胞研究神经生物学更少样本更短时间高通量代谢心血管疾病肿瘤移植细胞凋亡多因子检测涵盖了很多研究领域多因子检测产品广泛应用于疾病的研究 肿瘤 (如肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫颈癌等) 心血管疾病 (如高血压、动脉粥样硬化) 糖尿病、肥胖症 自闭症、老年痴呆症 自身免疫性疾病 (系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、哮喘、 过敏反应等) 炎症感染 (如结肠炎、克罗恩氏病、败血症等) 传染性疾病 (如艾滋病、肝炎等) 其它 (如多发性硬化症、营养不良、青光眼、阻塞性肺病、银 屑病等)多因子检测应用领域开发研究大学政府专业管理机构医学中心药物研发生物技术企业药物公司 基础医学、生物学研究 基础免疫学研究 细胞生物学如信号传导、凋亡 癌症研究、传染病等药物开发和疗效研究临床研究医院医学中心早期诊断临床实验室大学检测测试中心实验室诊断医院专业检测机构所有流式细胞仪客户什么是AimPlex多因子检测技术？AimPlex多因子检测技术：利用不同尺寸、不同荧光强度的多个微球群实现多因子的检测利用该技术，配合任何一台配备488nm激发光的流式细胞仪，即可实现24个指标的同步检测。 AimPlex技术原理一系列荧光强度不同的微球包被有特异性捕获抗体，与待测样本孵育后，加入检测抗体，形成“三明治”复合物流式细胞仪检测荧光，从而实现对蛋白抗原的检测；结合抗原标准品的标准曲线，可实现对蛋白抗原的定量检测。 不同大小，不同荧光强度的捕获微球，在FCM FL4检测PE 荧光强度即为靶蛋白量123546微球12354不同的目标蛋白不同大小种类微球分布FL4(Differentiator Parameter)FL2 (Reporter Parameter)AimPlex检测过程AimPlex结果的提取和分析流式细胞仪： 几乎所有流式细胞仪都可以使用，只要具有488nm激发光源FCAP Array 3.0 软件可计算被测样本中待检物的浓度标准曲线分析FCAP array 3.0 Software曲线自动生成线性或对数形式显示回归曲线拟合样本检测举例Human Th1/Th2 Standard: BlankHuman Th1/Th2 Standard: 14 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 42 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 123 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 370 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 1,111 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 3,333 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 10,000 pg/mlHuman Th1/Th2 unknown 1Human Th1/Th2 unknown 2AimPlex优势 高通量，多指标同时检测一个标本多达24个指标 需要标本量少节省样品（25 μL）、试剂、实验空间、仪器设备 选择灵活研究人员可以根据实验需要，自由组合检测指标 耗时短整个过程只需3个多小时 要求低 - 适用于所有含488激发光的流式细胞仪 宽范围，高灵敏 -更宽检测范围，高灵敏度，高特异性，高重复性更宽的检测范围药明康德客户需求：检测小鼠肝癌模型的AFP浓度Lower concentration range standard curve for better calculation of samples with very low AFP concentrationAimPlex and Luminex产品对比人外周血不同处理后分别用Aimplex Th1/Th2/Th17 (7个指标）检测和Luminex试剂盒检测结果对比AimPlex ELISAVS例子：40个样本 7个指标：IFN-gamma,IL-10,IL-17A,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha　AimPlexELISA样本量15uL 350-700ul 所需检测板 1块 7块 操作时间4h47h 检测范围2-5000pg/mL 2 - 1500pg/ml 反应体系同一 不同