病毒感染的检查方法与防治原则PPT.ppt

医 学 微 生 物 学(Medical Microbiology) 第二篇 病毒学 第二十四章 病毒感染的 检查方法与防治原则 教学目标 熟悉： 人工主动免疫和人工被动免疫的常用生物制品。 了解： 病毒感染的实验室诊断方法。有效抗病毒药物的抗病毒机制及应用价值。 思考： 病毒如此之小和活细胞内寄生，我们如何分离培养及检查？ 血清学诊断和分子生物学检查的理论基础是什么？ 可通过什么方式预防病毒的感染？ 对抗病毒有招--巴斯德在1889年发明了狂犬病疫苗 病毒的面貌清晰地呈现在人们的眼前仅仅百余年的历史，但明确的病毒致病的记载早在四百多年前就有了。早在1566年，疯狗咬人致病的案例已经被记录下来，但直到1885年，人们还不知道狂犬病到底由什么引起。 在细菌学说占统治地位的年代，巴斯德的试验为狂犬病的防治开辟了新的路径。巴斯德发现，将狂犬病延髓提取液多次注射兔子后，再将这些毒性已递减的液体注射狗，狗就能抵抗狂犬病毒的侵染。  1885年的一天，人们把一个被疯狗咬过的9岁男孩迈斯特尔送来求救，巴斯德给这个孩子注射了毒性减到很低的提取液，然后再逐渐用毒性较强的提取液注射。巴斯德的方法拯救了男孩的生命。 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒分离培养方法类型 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation） 标本 无菌处理 细胞培养 鸡胚培养 动物接种 指标阳性 指标阴性 病毒鉴定 盲传2～3代 指标阴性 病毒阴性 一般程序 1.动物接种 最原始 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒 2.鸡胚接种 孵化9～14天的鸡胚 3.细胞培养 在一定条件下用离体的活组织或活细胞培养病毒的方法 证实病毒存在的方法： ① CPE ② 红细胞吸附及凝集 ③ 干扰现象 ④ pH值改变 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落 如腺病毒等多数病毒 腮腺炎病毒感染细胞 红细胞吸附（hemadsorption） HA＋红细胞表面HA受体→细胞吸附 病毒胞膜表面血凝素(HA) ＋ 相应抗体＋红细胞→吸附抑制 红细胞吸附抑制试验 干扰现象（interference） 风疹病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(－) 埃可病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(＋) ＋人胚肾细胞 风疹病毒 埃可病毒 CPE(-)—风疹病毒(+) 埃可病毒(-) CPE(+)—风疹病毒(-) 埃可病毒(+) （二）病毒的鉴定 1.形态学鉴定 电子显微镜 2.病毒的血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型 血凝抑制试验、免疫标记 3.病毒分子生物学鉴定 三、病毒感染的诊断（一）病毒形态学鉴定 电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）或包涵体，对一般病毒检测意义不大 （二）免疫学检查法 检查病毒抗原 ELISA 血凝抑制试验、中和试验 检查病毒特异性IgM 风疹病毒、甲型肝炎病毒等 （三）检查病毒核酸 核酸杂交技术 PCR技术