病理制片和染色技术PPT.ppt

⑶ 在染色过程中，即要按照书本的方法去进行操作，又要根据实际情况进行灵活运用。在实践中，不断地总结经验和教训，才能熟练掌握染色方法和提高实际工作能力。⑷ 由于染色方法较多，掌握染色种类应多一些，对不同的组织选用针对性较强的方法进行染色，才能提高染色质量。 六、染色中的基本原则 一、染色前的处理㈠ 脱蜡至水 凡是石蜡切片必须经过二甲苯脱蜡，各级乙醇至水洗的过程。（切片脱蜡、二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5’—10’ →95%乙醇ⅠⅡ各5’ →75%乙醇 5’ →自来洗水冲）二甲苯和各级乙醇必须保持一定纯度，不能混入其他杂质成分，而使染色受到影响。 ?㈡ 除去汞盐沉淀物 对于用升汞固定或含有升汞混合固定液的切片，切片脱腊后需脱汞（浸入5%碘酒精10’），脱碘（5%硫代硫酸钠）→流水洗→染色。 ㈢ 脱甲醛色素 甲醛固定组织时间较长及温度较高情况下，甲醛易氧化自行分解产生甲酸，导致组织成酸性，此时可能有甲醛色素产生。此种色素无光泽，不溶于水，乙醇，二甲苯等。对于这种色素可用下列方法除去。 1 浓氨水1 ml，75%乙醇200 ml。切片脱蜡后置溶液中30 ’或较久→流水洗→染色。 2 1%氢氧化钾1 ml，80%乙醇100 ml。切片脱蜡后置溶液中10 ’ →流水洗5 ’ →80%乙醇5 ’ →蒸馏水洗→染色。 ㈣ 除铬沉着物 有些组织用含铬的Ｚenker氏液等固定，致有铬沉淀物。可应用盐酸乙醇溶液，或用5%碘酒和5%硫代硫酸钠水溶液处理。 二、染色后的处理㈠ 染色后的脱水 对于大多数的切片，染色后必需要经过脱水。95%乙醇Ⅰ、Ⅱ各5 ’→100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各 5 。’㈡ 染色后的透明 组织经过脱水核透明后会产生一定的折射率，为防止空气中的有色素的细小颗粒沉淀在组织中的不良影响，需加透明处理以使组织切片清晰。二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5 ’ 透明。 ?三、? 染色封固剂  组织制片需随时检查和保存，故要有盖玻片封固。通常用中性树胶，此封固剂质量已普遍应用。?  第五章  苏木素、伊红染色的 应用及其配制 ? 一、苏木素染色的应用（1）HE染色在医学领域中的组织学、生物学、病理学及其细胞检查中，是必不可少的最基本染色方法。（2）在病理诊断（活检）、教学、科研工作中都被广泛应用，对细胞学的观察也具有重要价值。（3）HE染色主要显示各种组织正常成份和病变的一般形态结构，病理组织学的基本知识大部分都是从观察HE染色切片中获得的。 二、HE染液的配制⒈ 苏木素染液苏木素又称苏木精，为植物染料，是从苏木树树心提炼出来的天然染料（淡黄褐色粉末），易溶于酒精、甘油、加热可溶于水。苏木素本身没有染色能力，配制时必须加入含金属的媒染剂（钾明矾），才能达到染色之目的，配制后还需经过氧化成熟产生苏木红才能进行染色（有自然氧化成熟和人工氧化成熟）。 配制法有下列几种（1）哈瑞氏（harris）苏木素染液最常应用染色时间为5’—10’配制  ① 蒸馏水 1000ml  ② 苏木素 3—5g ③ 碘酸钠 1g ④ 钾明矾 50—80g ⑤ 水醋酸 20ml其优点是： 配后即可应用染色力较强。其缺点是： 极易产生金属膜沉淀。 ?（2）埃利希（Ehrlich），苏木素染液 配制 ① 无水乙醇 100ml ② 甘油 100ml ③ 苏木精 2g ④ 钾明矾 2—3g ⑤ 醋酸 5—10ml置于阳光下自然氧化3个月左右成熟。其优点是： 染色结果甚佳，贮存愈久染色愈强，而且不需分色。 ⒉ 伊红染液 苏木素染色后，需用伊红染料作对比染色，伊红着色深浅不一，如胶元纤维粉红色，肌纤维深红色、红血球橙色。这样细胞核、细胞桨着色清晰、鲜明，便于鉴别。  伊红常用配制有两种1）0.5%--1%水溶性伊红乙醇液 伊红y 0.5--1g+95%乙醇25ml+蒸馏水75ml+醋酸 1—2滴。 2）伊红 B 0.5g+80%乙醇100ml溶解后用 浸蜡的方法是将组织经过二甲苯透明以后，并立即投入到液体石蜡中去。在浸蜡时组织必须经过数次纯