病理组织切片技术PPT.ppt

透明 目的 透明是制片过程中很重要的环节。大多数脱水剂不能和包埋剂（如石蜡）混溶，而透明剂即可与脱水剂混溶，又能和包埋剂（如石蜡）混溶，能起到桥梁作用。 常用的透明剂 苯 甲苯 二甲苯（最常用的透明剂） 三氯甲烷 汽油 香柏油 冬青油 松油醇 常用的透明 方法 将脱水后的组织块先用乙醇-二甲苯混合液处理或直接浸入透明剂中，置换透明剂2~3次即能达到目的。 透明的时间的长短取决于标本的种类和组织块的厚薄，一般活检标本透明15~20min即可。 四、浸蜡、包埋 浸蜡 定义 经过透明的组织块在溶化的石蜡中浸渍，使组织中的透明剂被完全置换出来的过程 浸蜡的 目的 使石蜡浸入组织中，取代组织中含有的透明剂 。 浸蜡的 种类 石蜡 明胶 火棉胶 树脂 碳蜡 又是包埋剂。 既是透明剂， 浸蜡的方法 熔点：56~58℃ 温度：58~60℃（高于石蜡熔点2~3℃） 浸蜡的 注意事项 首先，应保证所用石蜡的质量，尽量不含杂质，否则易造成切片刀刀口受损或切片破碎、划痕增多。 其次，浸蜡用的石蜡熔点应控制在55~58℃。蜡温过低，浸蜡不良；蜡温过高回烫伤组织，是组织收缩、变硬、切片时易脱片、卷片。 再次，要控制好浸蜡时间。时间过短，蜡没有完全渗入组织、组织过软；时间过长，造成组织硬脆。两者均可造成切片困难。另外，应尽量去除沾在组织上的二甲苯，在浸蜡。 浸蜡机 包埋 定义 将浸蜡后的组织置于融化的固体石蜡中，石蜡凝固后，组织即被包在其中称蜡块，此过程称为包埋。 包埋的目的 有利于组织块的妥善保存 有利于切成薄片 可使组织具有一定硬度和韧性 包埋方法 石蜡包埋法（最常用） 火棉胶包埋法 碳蜡包埋法 明胶包埋法 包埋的注意事项 包埋时，框要比组织块大，保证蜡块 组织周围都有蜡边，对管、腔、壁组织要垂直包埋，而胃、肠、胆囊等组织，应将能看到的组织学各层面作为切面，其他组织则将切面朝下，小块多颗组织尽量放在一起并保持在同一水平面；包埋的蜡质不能含有杂质、纸絮、缝线等异物，最好是经过多次溶化、沉淀过的蜡。以利于切片。 包埋机 组织包埋盒 四、切片 常用的切片方法 石蜡切片 冰冻切片 火棉胶切片 切片前准备 (1)修整蜡块 可视其组织的大小，在组织边缘约0.1～0.2cm处，切去余蜡部分。 否则易造成组织皱缩不平。 (2)准备好切片用具 切片刀 毛笔 眼科镊子（弯） 漂烘温控仪 (3)安装蜡块 将修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器上 (4)安装切片刀 将切片刀安装在切片机的刀台上，把刀台上的紧固螺丝旋紧，使切片时不产生振动，能保持一定的切片厚度 组织切片刀 (5)切片的厚度 切片机的厚度调节器上刻有0～50μm或0～25μm，可任意选择其厚度，石蜡切片的厚度一般在4～6μm 切片制作过程 将切片刀安装于刀架上（调整好刀的角度，一般为20~30°左右） 将蜡块固定在切片组织块夹具上 调整组织块夹具的调节蜡旋，使蜡块切面与刀口平行。 先粗修（ 30～50um ） 细修（ 10um ） 切片的注意事项 切片前蜡块要冷冻，但不能把刚包埋好的热蜡块冷冻，否则蜡块会产生裂痕，一夹就碎。 蜡块装机时，应注意组织包埋的方向，组织的层次、纤维、肌肉等走向应与切片刀平行。 蜡块在切片机固定加紧后要修块，组织块上下留边各2mm 蜡片厚度一般在3-5um 同一把切片刀每次要固定角度 切片有纵纹,可能与切片刀有小缺口或修块时未把杂物去除,以及石蜡不洁有关 组织制片技术 病理组织制片技术  定义 要实现对病变组织的显微镜形态学检查，需要将获得的病变组织制片。我们将切片制作所采用的一系列技术。 组织制作基础制作流程 封片 染色 烤片 贴片 展片 切片 包埋 浸蜡 透明 脱水 洗涤 固定 取材 一、取材 定义 按照病理检查的目的和要求，切取适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程。 切片刀 取材 要求 (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5c