第八章 药物定量分析分析方法验证.ppt

第八章 药物分析方法验证 一、为什么验证（目的） 二、什么时候验证（时机） 三、如何验证（内容） 四、验证哪些分析项目（适用项目） 一、为什么验证（目的） 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求。 方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起草或修订说明中。 二、何时验证 （一）建立药品质量标准时，分析方法需经验证。 （二）药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。 验证内容有：准确度、精密度（重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。 三、验证内容 （一） 准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用回收率（%）表示。 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。 回收试验：空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M 1. 含量测定方法的准确度 原料药可用已知纯度的对照品或供试品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较。 制剂可用含己知量被测物的各组分混合物进行测定，即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。 如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较。 中药分析的准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在95～105%范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在90～110%范围内。RSD一般在3%以内。 2．杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。 （二）精密度（precision） 精密度是指在规定测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。 标准偏差（SD或S） 相对标准偏差（RSD），也称变异系数（CV） 1. 重复性 在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用9个测定结果评价，例如，设计3个不同浓度，每个浓度分别制备3份供试品溶液，进行测定。或将相当于100%浓度水平的供试品溶液，用至少测定6次的结果进行评价。 2. 中间精密度 同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。 3. 重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度。法定标准采用的分析方法，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。 （三） 检测限（ LOD , limit of detection） 检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。限度试验参数，无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。 1．非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。 2．信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析法），是把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。 3．数据要求 应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。 （四）定量限（ LOQ， 1imit of quantitation） 指试样中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度。 常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10∶1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。 （五）专属性（specificity） 系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。 1．鉴别反应 应能与可能共存的物质或结构相似化合物区分。 不含被测成分的样品，以及结构相似或组分中的有关化合物，均应呈负反应。 2．含量测定和杂质测定 色谱法和其他分离方法，应附代表性图谱，以说明专属性。并应标明诸成分在图中的位置，色谱法中的分离度应符合要求。 在杂质可获得的情况下，对于含量测定，试样中可加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并可与未加杂质或辅料的试样比较测定结果。对于杂质测定，也可向试样中加入一定量的杂质，考察杂质能否得到分离。