肿瘤单克隆抗体的制备.pptx

人源化单克隆抗体By hyglix group人源化单克隆抗体是什么？ 分类方法： 人源化抗体就是指抗体的可变区部分（即Vh和Vl区）或抗体所有全部由人类抗体基因所编码。人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应人源化抗体包括嵌合抗体、移植抗体和全人源化抗体等几类。基因工程抗体目的：保留抗体的抗原结合能力、易于大规模生产、减小鼠源性成分，增加人源化，可用于临床。基本原理：借助于基因工程手段，将编码Ab的重轻链可变区基因重组到真核或原核表达载体上并进行表达。国外市场情况：单克隆抗体，90年代后期上市以来，经过多年的开发，终于在某些疾病的治疗上取得突破。抗体进入临床研究，其中16个已进入市场，2002年销售额达29亿美元，预计2005年将达近90亿美元。 根据商业通讯公司预测，2002年全球治疗与诊断用抗体市场为73亿美元，预计将以每年16.6%的平均速度增长，到2007年可达到157亿美元。2001年诊断用抗体市场为4.41亿美元。人源化单克隆抗体的临床应用在肿瘤治疗方面的应用在器官移植中的应用在自身免疫性疾病方面的应用未来发展方向目前，抗体人源化方法还在不断发展和晚上，目标是提高抗体亲和力、降低抗体异原性，同时兼顾抗体的免疫活化作用。另外，针对不同的异源抗体。选择合适的人源化途径构建更适合于临床应用的人源化抗体，将为新药的开发和一些顽固的治疗开辟新的途径。CDR移植Ab1、模板替换2、表面重塑3、补偿变换4、定位保留全人源化抗体恒定区人源化--鼠/人嵌合抗体（chimeric antibody）表达产物——嵌合抗体的纯化 以A 蛋白包被的小珠通过吸附和解吸过程来纯化抗体, 这种A 蛋白可牢固地结合于免疫球蛋白重链Fc 段第二和第三恒定区。 并非所有免疫球蛋白对A 蛋白的亲和力都相同 在纯化抗体前, 必须采用商品化的抗Fc 段同种型免疫学试剂先行测定其重链所属的类型, 如抗体属于对A 蛋白亲和力弱的一类( 如人的IgG3) , 就必须使用其他方法。嵌合抗体检测 Western 印迹法是检测抗体的常用方法。此种技术是把电泳分离的蛋白组分从凝胶转移至一种固相支持体, 并以针对特定的氨基酸序列的特异性试剂检测之。对于嵌合抗体来说, 通常使用的探针为抗体。完全人源性单克隆抗体1，筛肿瘤特异性抗原：（1）利用T细胞筛内源性抗原（2）利用Hu-PBL-SciD小鼠筛抗体结合抗原,2，抗体制备及构建抗体库技术：（1）合成抗体库技术及小鼠转基因技术（2）核糖体展示技术（3）噬菌体抗体库技术3，筛选技术及表达（1）亲和筛选（immobilized panning)（2）捕获法(capture panning )（3）完整细胞淘洗(whole cell panning )筛选肿瘤抗原1，利用T细胞筛选抗原Pre-T细胞 混合培养以诱导CTL CTL细胞肿瘤细胞 杀伤与否?CDNA文库 转染的细胞 2，SCID小鼠筛选抗原SCID小鼠 肿瘤细胞 构建HU-PBL-SCID小鼠 能否免疫应答淋巴细胞B淋巴细胞肿瘤细胞CDNA文库 免疫抗原转染表达MHC I类的靶细胞特异抗体制备及1，合成抗体库及小鼠转基因技术（一）合成抗体( Syntheticantibody library)。1，在对人或鼠抗体序列和主体结构进行分析的基础上, 合成多条VH和VL基因, 用来替代所有的抗体类别和结构, 组成多个总抗体库。2，转基因小鼠的鼠抗体生成基因被相应的人基因取代，利用肿瘤抗原如EGFR 免疫含有人免疫球蛋白基因的转基因小鼠可制备高亲和力和特异性的抗体。特异抗体制备1，合成抗体库及转基因技术（二）转基因技术特异抗体制备及筛选2,核糖体展示技术核糖体展示 的基本过程：（1）构建核糖体展示的 D N A模板 ，依次体外转 录、 体外翻译成“mRNA-核糖体-蛋白质” 复合物。（2）抗原固相亲和筛选或者肿瘤细胞为固相细胞筛选技术。然后洗脱，核糖体解离 ， 释放 mR N A。后者经 过纯 化后 用作RT-PCR的模板 ， 重新引入核糖体展示的各种必需元件 ， 进行新 一轮的核糖体展示。（3）最后得到纯化的特异性抗体mRNA。（4）利用转基因或者克隆技术表达抗体。特异抗体制备及筛选筛选技术人源单抗表达系统（1）大肠杆菌中表达（2）酵母中表达（3）动物细胞（昆虫细胞或哺乳细胞株）（4）植物细胞。。。。。。完全人源性单克隆抗体制备与应用利用T细胞筛内源性抗原 合成抗体库技术筛肿瘤抗原抗体库构建核糖体展示技术利用Hu-PBL-SciD小鼠筛抗