胡萝卜根的培养赛课PPT.ppt

胡萝卜根的离体培养 成 都 师 范 学 院 外植体的取材、消毒和培养技术 无籽西瓜 成 都 师 范 学 院 如 何 繁 殖？ 成 都 师 范 学 院 植物组织 愈伤组织 长出丛芽 长根 完整植株 成 都 师 范 学 院 在 下，把植物体的器官或组织片段切下来，接种在适当的 上进行离体培养，这些器官或组织的细胞就会经过 和 的过程，逐渐产生出植物的各种组织和器官，进而发育成 。 无菌条件 人工培养基 脱分化 再分化 一颗完整的植株 植物细胞的全能性 成 都 师 范 学 院 用于离体培养的植物器官或组织片段，叫做外植体 1、操作房间、操作流程的无菌 接种室的消毒 超净工作台的消毒 成 都 师 范 学 院 甲醛高锰酸钾熏蒸 高锰酸钾与甲醛反应，缓慢放热， 促进甲醛挥发，杀灭物体表面和 空气中的细菌繁殖体 紫外线杀菌 使细菌核酸突变，生产蛋白质能力 丢失，导致细菌死亡。 成 都 师 范 学 院 紫外灯开启杀菌 杀菌结束，白炽灯开启工作 2、操作人员的消毒 a.操作人员进入无菌接种室需要穿白大褂，在无菌室禁止交谈 b.接种前，操作者要用肥皂清洗双手，擦干 成 都 师 范 学 院 c.操作者进入接种室后，用酒精棉球擦拭双手及操作台面 成 都 师 范 学 院 3、接种器械的消毒灭菌 灼烧灭菌 镊子、剪刀、解剖刀等侵入95%的酒精中，使用之前取出在酒精灯上灼烧灭菌 成 都 师 范 学 院 使用注意：通过高温杀灭细菌，冷却后 立即使用，每次接触外植体后需要重新 灼烧。 利用酒精 灯的外焰 常用消毒剂：75%的乙醇及10%的次氯酸钠 消毒的原则： 成 都 师 范 学 院 4、外植体消毒灭菌 1）消毒剂与外植体应该接触足够长的时间以除去外植 体表面的微生物，但应尽量减少对外植体细胞的破坏。 2）灭菌时间从倒入消毒液开始计时，至倒入无菌水为止 3）灭菌液要充分侵没材料。 胡萝卜根的离体培养 选取对象： P-木质部、C-形成层、 X-韧皮部 成 都 师 范 学 院 C-形成层 为什么选取形成层？ 成 都 师 范 学 院 形成层的细胞分裂能力强，且基本不携带病毒.全能性也相对比较高。 1.清洗 清水洗净胡萝卜 去掉表皮 把胡萝卜切成3cm的段 成 都 师 范 学 院 （一）胡萝卜根的消毒灭菌 2.消毒 向带有螺口盖的玻璃瓶中倒入适量的75%的酒精，取胡萝卜条，侵入75%的酒精中，30s后倒出酒精。 成 都 师 范 学 院 （一）胡萝卜根的消毒灭菌 75%酒精 3.灭菌 向玻璃瓶中倒入10%的次氯酸钠溶液，拧上瓶盖，消毒5-10min。 成 都 师 范 学 院 消毒期间，要将玻璃瓶摇动2-3次。 （一）胡萝卜根的消毒灭菌 10%次氯酸钠 4.洗掉消毒剂 消毒后，打开瓶盖，将消毒液倒入烧杯中，在玻璃瓶中加入适量的无菌水，盖上瓶盖，摇动数次，将水倒去。 重复3-4次，用无菌滤纸将胡萝卜段表面的水吸干。 成 都 师 范 学 院 （一）胡萝卜根的消毒灭菌 1. 打孔 将消毒的胡萝卜段放入无菌培养皿中，用灭过菌的打孔器沿着形成层穿入胡萝卜中，取得一段含有形成层的3cm的圆柱体。 成 都 师 范 学 院 （二）接 种 （二）接 种 2. 切割 用消毒后的解剖刀截去两头越1cm长度的与消毒剂接触的胡萝卜段，余下部分沿截面将其横切成1mm左右的小圆片。 成 都 师 范 学 院 3. 接种到培养基 将切好的胡萝卜的外植体迅速接种在MS+0.5mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA的固体培养基上。 成 都 师 范 学 院 （二）接 种 3. 接种 每个培养瓶可接种4-6块外植体，注意培养瓶口应斜向火焰。 成 都 师 范 学 院 （二）接 种 （三）接 种 成 都 师 范 学 院 3. 接种 材料接种好后，将培养瓶的瓶口在酒精灯火焰上转动灼烧一遍，拧紧瓶盖，以免微生物进入，造成污染，导致培养失败， （三）接 种 成 都 师 范 学 院 4.标记 接种完成后，在瓶壁上贴上标签，注明接种材料的名称、编号和接种日期。 操 作 示 例 成 都 师 范 学 院 成 都 师 范 学 院 成 都 师 范 学 院 成 都 师 范 学 院 成 都 师 范 学 院