磺胺药物残留量检验操作规程.doc

磺胺残留量检验操作规程 1．引用标准：NY5029-2001附录E《磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法 2．适用范围：用于组织中磺胺类药物残留的检验 3．分析方法 3.1试剂 乙腈：色谱纯。 正己烷：分析纯。 无水硫酸钠：分析纯。 乙酸：分析纯。 正丙醇：分析纯。 标准品：纯度≥99%。 3.2标准溶液 3.2.1标准储备液：准确称取磺胺标准品各10.0mg，分别入各自的100ml容量瓶，用甲醇溶解，并用甲醇稀释定容，混匀。即得磺胺标准储备液。每种磺胺标准品的浓度为100μg/mL。 3.2.2混合标准中间液：分取磺胺标准储备液各250uL，入25mL容量瓶，用流动相稀释定容，即得混合标准溶液。该混合标准溶液含每种磺胺1.0μg/mL。 3.2.3混合标准工作液：移取所需容积的混合标准中间液，用流动相稀释定容至1ml，即得混合标准工作液。该工作液当日新配。 3.3测定步骤 3.3.1提取和纯化 称取2.00g（精确到0.1g）均匀试样，加入乙腈5mL，无水硫酸钠5g，涡旋混合后，以3000转/min的速度离心5min。分离后的残渣再用5.mL乙腈处理，振荡10min后，以3000转/min的速度离心5min。合并两次的上清液，加入正己烷10mL，振荡10min后，以3000转/min的速度离心5min，取下层液体，加入正丙醇10mL，50℃以下减压干燥，残留物用95%乙腈3mL溶解，过氧化铝柱，用95%乙腈5mL过柱，不收集，再用70%乙腈洗脱后，洗脱液中加入5mL正丙醇，50℃以下减压干燥，残留物用2.0mL流动相溶解，用于高效液相色谱仪检测。 3.4.色谱条件 a．色谱柱:：不锈钢柱，150mm*4.6mm(内径)，C18柱。 b．柱温：40℃。 c．流动相：乙腈+甲醇+乙酸+水(2+2++0.2+9)。 d．流动相流速：1.00mL/min。 e．检测器：UV270nm。 f．进样量：20μL。3.5样品测定 分别向液相色谱仪注入等体积标准工作液和样液，在40℃，以1.0mL/min的流速洗脱，用UV检测器于270nm处检测，记录色谱峰高，并与相应的标准峰高进行比较，外标法定量。样品测定过程中要穿插进标准工作液，以便准确定量。 3.6空白试验：除不加试样外，按上述步骤进行。 3.7结果汁算和表述：用色谱数据处理机或按下列公式计算： 式中，X—试样中磺胺类药物残留量，mg/kg h—试样中磺胺类药物的峰高，mm h s—标准工作溶液中磺胺类药物的峰高，mm c s—标准工作溶液中磺胺类药物的浓度，μg/mL m—称取的试样量，g v—试样最终定容体积，mL 注：计算结果需扣除空白值 4．检测精度 4.1 仪器检测限及定量限 项 目 标准溶液浓度（mg/kg） 峰高 （mm） 曲线方程 Sy/x 仪器的响应值YLOD 仪器的响应值YLOQ 仪器的检测限LOD 仪器的定量限LOQ 磺胺甲基嘧啶 0.01 62 y=6271.31x- 4.41957 6.037289687 13.6923 55.95333 0.002888 0.009627 0.02 124 0.05 300 0.1 624 0.2 1251 磺胺二甲基嘧啶 0.01 53 y=5425.207x- 6.51575 5.827348268 10.9663 51.7577 0.00322 0.01074 0.02 104 0.05 257 0.1 534 0.2 1081 磺胺间甲氧嘧啶 0.01 38 y=4555.39x- 8.40962 5.316619748 7.54024 44.7566 0.0035 0.01167 0.02 88 0.05 212 0.1 447 0.2 904 磺胺二甲氧嘧啶 0.02 50 y=2230.522x+ 2.176707 3.507307346 12.6986 37.2498 0.00472 0.01572 0.05 110 0.1 225 0.2 449 磺胺喹惡啉 0.02 26 y=1671.8876x- 7.899598 6.254636834 10.8643 54.6468 0.01122 0.03741 0.05 80 0.1 152 0.2 329 4.2添加回收率及方法检测限 项 目 添加标准溶液浓度（mg/kg） 检测值（mg/kg） X的标准偏差 方法的检测限LOD 方法的定量限