生物检查法.doc

1 1 0 0 生物检查法 1 1 0 1无菌检查法 无菌检查法系用于检査药典要求无菌的药品、生物制 品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方 法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该 检验条件下未发现微生物污染。 无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌 检査的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物 污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单 向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区） 悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行 洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内 部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试 验环境进行监控。 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于 需氧菌的培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的 培养。 培养基的制备及培养条件 培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符 合规定的脱水培养基或成品培养基。配制后应采用验证合格 的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2?25°C、避光 的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3 周内使用；若保 存于密闭容器中，一般可在一年内使用。 1. 硫乙酵酸盐流体培养基 胰酪胨 15_ 0g 氣化钠 2. 5g 酵母浸出粉 5. 0g 新配制的0. 1 % 刃天 无水葡萄糖 5.0g 青溶液 1.0ml L-胱氨酸 0. 5g 琼脂 0. 75g 硫乙醇酸钠 0.5g 水 1000ml (或硫乙醇酸） （0_3ml) 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶 解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加人葡萄糖和刃天青 溶液，摇匀，调节p H , 使灭菌后在2 5 ° C的p H 值为 7.1 土0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例 应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度 的1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得 超过培养基深度的1/5，否则，须经100°C水浴加热至粉红 色消失（不释过2 0分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防 止被污染。 除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置3 0?3 5 C 培养。 2.胰酪大豆胨液体培养基 胰酪胨 1 7 .0g 氣化钠 5.0g 大豆木瓜蛋白酶水解物 3. 0g 磷酸氢二钾 2. 5g 葡萄糖/无水葡萄糖 2. 5g/2. 3g 水 1 0 0 0m l 除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调 节p H 使灭菌后在2 V C 的p H 值为7. 3 ± 0. 2，加入葡萄糖， 分装，灭菌。 胰酪大豆胨液体培养基置20?2 5 1培养。 3 .中和或灭活用培养基 按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基 的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、 灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。 4. 0 .5%葡萄糖肉汤培养基(用于硫酸链霉素等抗生素的 无菌检查） 胨 1 0 .0g 氣化钠 5 . 0g 牛肉浸出粉 3 . 0g 水 1 0 0 0m l 葡萄糖 5. Og 除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为 弱碱性，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇勻，滤清，调节p H 使灭菌后在25°C的p H 值为7. 2士0.2，分装，灭菌。 5 .胰酪大豆胨琼脂培养基 胰酪胨 15.0g 琼脂 1 5 .0g 大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g 水 1 0 0 0m l 氣化钠 5.0g 除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节p H 使 灭菌后在25°C的p H 值为7_3士0.2，加人琼脂，加热溶化 后，摇匀，分装，灭菌。 6 .沙氏葡萄糖液体培养基 动物组织胃蛋白酶水解物 水 1 0 0 0m l 和胰酪胨等量混合物10. 0g 葡萄糖 20.0g 除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，调节p H 使灭菌后在25°C的p H 值为5. 6 士 0.2，加人葡萄糖，摇匀， 分装，灭菌。 7 .沙氏葡萄糖琼脂培养基 动物组织胃蛋白酶水解物 琼脂 15.0g 和胰酪胨等量混合物1 0 .0g 水 1 0 0 0m l 葡萄糖 40.0g 除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调 节p H 使灭菌后在25°C的p H 值为5. 6士0.2，加人琼脂，加 热溶化后，再加入葡萄糖，摇勻，分装?_怛?_?_，灭菌。 培养基的适用性检査 136 ? 歌渝公l郁蓄ouryao · com 中国药典2015年版1101 无菌检查法 无菌检査用的硫乙醉酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培 养基等应符合培养基的无菌性检査及灵敏度检査的要求。本检 查可在供试品的无菌检査前或与供试品的无菌检査同时进行。 无菌性检查每批培养基随机取不少于5 支(瓶），置