噬菌体生物学ppt课件.ppt

Phage LL-H transduced plasmid pX3 from strain LKT(pX3) to each of all five tested L. delbrueckii strains at very high frequency: from 0.1 to 1. The high frequency of plasmid transduction obtained in this study is not a consequence of either plasmid pX3 or phage LL-H alone, but is a result of specific interaction(s) between plasmid pX3 and phage LL-H. Thank you! * * * 噬菌体治疗的不足 噬菌体可释放一些毒素 编码大肠杆菌O157的毒力基因stx1和 stx2可以导致发炎反应和提高致病性。 噬菌体治疗的发展趋势 扩大噬菌体谱 改造宿主菌的裂解方式 开发噬菌体抗感染药物 发展趋势 大多数噬菌体都是专一性的对某种细菌起作用，治疗范围受限，我们可以通过基因工程技术将多种噬菌体吸附宿主菌的关键基因转化入同一噬菌体中并使之表达，从而产生一种可以对多种细菌同时具有裂解作用的新噬菌体。 噬菌体通过holin蛋白和细胞内溶素两种物质造成细菌裂解。通过对产生这两种物质的基因进行改造，改造后的噬菌体具有高效杀死细菌的能力。 目前美国4家公司正试图研制针对一些重要的病原菌,如耐万古霉素肠球菌(VRE)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和食物传播的病原菌(沙门菌)的噬菌体。Phage Ther-apeutics公司抗葡萄球菌制品已配制完成,其制造工艺已获FDA批准。 。 有的噬菌体基因组较大，可将外来目的DNA替代或插入到噬菌体基因组的某些序列中，使目的DNA随噬菌体的繁殖而大量复制和表达。 第四章 噬菌体载体 噬菌体载体分类 1 噬菌体 载体 λ噬菌体载体 P1噬菌体载体 M13噬体 cos载体和噬菌粒 λ噬菌体颗粒中 的DNA是一线性 双链DNA分子，长 48 502bp，两端 各有12个碱基的 5`凸出黏性末端 是互补的。进入 细胞的λDNA通过 两端的黏性末端环化。 λ噬菌体 2 λ噬菌体性质与用途 在λDNA分子上有多种限制性核酸内切酶识别位点，便于多种外源DNA酶切片段的克隆 能承载比较大的外源DNA片段，约23kb左右 用途:主要用于cDNA文库构建和外源目的基因的克隆。 2 λ噬菌体基因图谱 3 λ噬菌体载体的构建 切去λDNA上 部分非必需的 区域和多余的 限制性核酸内 切酶切割位点 插入可供 选择的标 记基因 2 1 建立λ噬菌体 体外包装系统 3 基本策略 4 λDNA载体的构建 缩短长度 插入型载体 插入位点 体外包装 载体长度 37 kb 插入片段大小： 0 - 14 kb （51 – 37） 插入片段 体外包装 λ噬菌体克隆载体的主要类型 插入型载体 λDNA载体的构建 载体长度 26 kb 插入片段 最小装载长度 10 kb （36 – 26） 体外包装 体外包装 插入片段 最大装载长度 25 kb （51 – 26） λ噬菌体克隆载体的主要类型 替换型载体 λ噬菌体标记基因 λ 重组体：正常生长 非λ重组体：不生长 λ 重组体：白色的噬菌斑 非λ重组体:蓝色的噬菌斑 λ 重组体：清晰型透明斑 非λ重组体:浑浊型噬菌斑 cI基因 lac Z基因 red gam基因 λ 重组体：清晰型透明斑 非λ重组体:浑浊型噬菌斑 cI基因 λ噬菌体载体克隆DNA片段步骤 构建λ噬菌体基因组文库的步骤 构建λ噬菌体基因组文库的步骤包括: 获得含基因的DNA片段 与λ噬菌体克隆载体重组 转化受体菌和筛选克隆子 噬菌体载体的应用 实例1 吉林大学的韩俊友博士应用噬菌体载体 λTripIEx2构建了牛蛙皮肤cDNA文库,为进一 步研究牛蛙皮肤组织抗菌肽奠定基础。 噬菌体载体的应用 实例2 中山大学的李艳雯教授应用噬菌体载体 λTripIEx2构建了大肠癌细胞cDNA表达文库 该文库包含了大肠癌HRT18细胞株所有的肿 瘤抗原cDNA，使得获得大