病毒感染与致病机制医学课件.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 在确定病原上是“黄金标准” ! 动物接种 鸡胚接种 细胞培养 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 动物接种 是最原始的病毒培养方法， 根据病毒种类不同，选择敏感动物及适宜接种部位， 如嗜神经性病毒（狂犬病毒）可接种于小鼠脑内； 痘病毒可接种于家兔角膜或皮内。 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 鸡胚接种 鸡胚对多种病毒敏感。 一般采用孵化9～14天的鸡胚， 根据病毒种类不同，将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位， 最常用的鸡胚接种部位有： 羊膜腔 尿囊腔 绒毛尿囊膜 卵黄囊等 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 鸡胚接种 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 鸡胚接种 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 细胞培养 原代细胞：原胚肾细胞 二倍体细胞：人胚肺WI-26株细胞 传代细胞：癌细胞 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 细胞培养 病毒在细胞中增殖的指标： 细胞病变效应-cytopathic effect, CPE 红细胞吸附现象-hemadsorption，HAd 干扰现象-interference 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 细胞培养 细胞病变效应-cytopathic effect, CPE 有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。 有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜，可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融合细胞。 有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养细胞中形成胞浆或核内的包涵体。 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 细胞培养 细胞病变效应-cytopathic effect, CPE 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 细胞培养 细胞病变效应-cytopathic effect, CPE 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 细胞培养 红细胞吸附现象-hemadsorption,HAd 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素，具有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的能力，这一现象称红细胞吸附； 常用来测定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖； 若有相应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA，HAd不再发生，称红细胞吸附抑制试验。 第一节 病毒学诊断 病毒的分离与鉴定 细胞培养 干扰现象-interference 某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化(如HAd)， 但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖。 如风疹病毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它能干扰后感染的埃可病毒的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。 第一节 病毒学诊断 病毒感染的血清学诊断 下列情况需要进行血清学检查： 采集标本中分离病毒已很困难； 目前尚未建立分离该病毒的方法和技术； 判断临床治疗效果； 进行流行病学调查； 基层医疗机构无法开展病毒分离实验。 第一节 病毒学诊断 病毒感染的血清学诊断 原理：是用已知病毒抗原来检测病人血清中有无相应抗体，故须待病人感染后体内产生抗体时才能检出。 另外，在采取临床标本及病人血清应注意病程，必须采取患者急性期血清与恢复期血清 (双份血清) 进行血清学试验。 若第2次血清抗体滴度比第1次高出4倍以上时，才有诊断意义。 第一节 病毒学诊断 病毒感染的血清学诊断 中和试验(neutralizing test, NT test) 补体结合试验 (complement fixation test,CF test) 血凝抑制试验(hemagglutinatia inhibition test, HI test) 凝胶免疫扩散试验 第一节 病毒学诊断 病毒感染的血清学诊断 中和试验(neutralizing test, NT test) 是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验。 中和抗体(ne