OECD测试准则蚯蚓繁殖试验.pptx

OECD化学品测试准则 蚯蚓繁殖试验 （赤子爱胜蚓/安德爱胜蚓）Organization for Economic Cooperation and Development 经济合作与发展组织，简称经合组织(OECD)，是由30个市场经济国家组成的政府间国际经济组织，旨在共同应对全球化带来的经济、社会和政府治理等方面的挑战，并把握全球化带来的机遇。介绍此测试准则的目的是评估土壤中的化学品对赤子爱胜蚓(Eisenia fetida，Savigny 1826) 或安德爱胜蚓(Eisenia Andrei ，Andre 1963) 繁殖输出的影响。OECD以前发布过一个关于蚯蚓的急性毒性试验的准则。一些对蚯蚓的急性和慢性试验的其他的国际和国家准则已经发布。赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）/安德爱胜蚓（Eisenia Andrei）通常被认为是土壤动物群尤其是蚯蚓物种的一个代表。在相关资料中可以获得蚯蚓的生态背景资料和其在生态毒理学测试中的用途。试验原理 使蚯蚓成虫接触一系列浓度的试验物质，这些试验物质可以是混合到土壤里，若为杀虫剂时，也可以应用到土壤或者土壤表面。应用方法视试验目的而定。选择的浓度范围中要包括在八周的时间内可能会引起亚致死和致死效应的浓度。在接触试验物质的4周后确定成虫死亡率和对蚯蚓成虫生长的影响。然后从土壤中取出成虫，再过四周后通过统计土壤中存在的子代数来评估对蚯蚓繁殖的影响。处理组的繁殖输出应当和对照相比较，以确定最大无影响浓度（NOEC，在毒性实验中某物质对受试生物无不利影响的最大浓度）和/或ECx (例如： EC10, EC50) 。ECx值 (例如： EC10, EC50)应当在试验选择的浓度范围内，使得ECx的测定来自插补法而不是外推法。试验物质信息在水中的溶解度（water solubility）辛醇 - 水分配系数（log Kow）蒸气压（vapour pressure）有效期和在环境中的特性（例如光解率和水解率，和应用方式相关）本准则适用于不论其水溶性如何的所有物质。但该方法不适用于挥发性物质，此处定义为物质的亨利常数或空气/水分配系数大于1。也不适用于25 ℃下蒸汽压超过0.0133 Pa的物质。本准则没有考虑试验物质在试验期间发生降解的可能性。因此，不能认为在整个试验过程中所设浓度始终是初始浓度。在这种情况下，建议在试验开始和结束时都对物质进行化学分析。参考物质 参考物质的NOEC和ECx值必须确定以保证足够的实验室试验条件和保证试验生物的响应不会随着时间发生统计学上的改变。建议一年测试参考物质一次，或者当试验进行频率比较低时，可以与试验物质的毒性一起测定。多菌灵和苯菌灵已被证明是对繁殖有影响的合适的参考物质。试验的有效性 对照组应满足下列条件才能认为试验结果有效：在试验结束时每个重复（包含10条成虫）应当产生≥30条幼虫；繁殖的变异系数应当≤30%；在试验开始四周后成虫死亡率应当≤10%。如果试验不能满足上述条件，那么试验应该终止，除非可以提供让试验继续下去的正当理由。该理由应当写进报告中。试验说明——设备 应使用玻璃或其它化学惰性材料制成的约一两升容量的试验容器。该容器应具有约200cm2的横截面面积，使得500-600g干燥基质添加进去后潮湿基质在容器内能够达到5-6厘米的高度。容器盖的设计应允许底物和大气之间有气体交换，并且透光（例如通过一个穿孔的透明盖），同时还要防止蚯蚓爬出。如果试验加入基质的量超过500?600g，那么容器中的蚯蚓数目也应该按比例增加。 常规的实验室设备是必需的，具体如下：干燥箱;立体显微镜;pH计和光度计;合适的精确天平；温度控制设备;湿度控制设备（不是必需的，若容器有盖子）;孵化器或带空调的小房间;镊子，钩或环;水浴锅。人工土壤的准备 在试验中所用的人工土壤应当包含以下组分：10％的泥炭（尽可能使pH值至5.5?6.0，无肉眼可见的植物残株，磨细）；20％的高岭土（高岭石含量最好在30％以上）；0.3%至1.0％的碳酸钙（CaCO3，细粉状，分析级）。70％风干的石英砂（取决于CaCO3的需要量），主要是含有超过50%的50-200μm之间颗粒的细砂。注：所需的CaCO3量取决于土壤基质（包括食料）的成分，实验前应当通过测量土壤次级样本确定下来具体数值。有时需要减少人工土壤中的有机碳含量，可以通过降低泥炭含量至4-5％或相应地增加砂粒含量。通过有机碳含量的减少，可以降低土壤中的有机碳对试验化学品的吸附并增加试验化学品接触蚯蚓的可能性。有证据表明在有机碳含量较低（如2.7%）的田间土壤试验时，赤子爱胜蚓遵守该繁殖有效准则，而且经验表明在有机碳含量5%的人工土壤中同样遵守该准则。 在通风的地方把土壤中的这些干燥成分进行充分混合（例如用一个大型的实验室用混