TAAR通过影响A型钾通道引起外周痛觉过敏及机制研究开题报告.ppt

开题报告 TAAR1通过影响A型钾通道引起外周痛觉过敏及机制研究 学生：秦文娟 导师：陶金 教授 1 2 3 4 研究背景 实验方法和内容 实验结果与分析 研究假设 目录： 研究背景： TAAR:Trace amine-associated receptor G蛋白偶联受体 配体：痕量胺 存在于动物神经系统中， 浓度0.1-10nM,含量小于生物胺1% 生物胺 如多巴胺，5-HT,去甲肾上腺素 药物：苯丙胺及相关化合物 治疗精神疾病等 与配体的亲和力： tyramine dopaminehistamine, serotonin 研究背景： 生物胺在疼痛中发挥重要作用： 5-HT可以促进外周疼痛敏感性。 中枢多巴胺功能紊乱与疼痛相关。 去甲肾上腺素参与痛觉过敏。 研究背景： 参与外周疼痛的离子通道： 研究假设： TAAR1 生物胺 A-type K 疼痛 ? ? ? Tyramine TAAR1 A-type K PAIN EPPTB 实验方法和内容： 动物： ICR小鼠，5-7周，雌鼠：雄鼠=1:1 药物： Tyramine用乙醇配置成1M储存液 其余溶于水的药物用钾外液配置成高浓度储存液，难溶于水的药物用DMSO配置成高浓度储存液。 药物现用现配，用钾外液/台式液/NS稀释储存液至目的浓度。 实验方法和内容： 三叉神经元培养： 小鼠断头，冰上取三叉神经； 33.5℃恒温，通氧，胶原酶1.5mg/ml消化45min,胰酶1mg/ml消化30min； 巴斯管吹打后，神经元均匀悬浮在DDB中； 将悬浮神经元均匀滴在24孔板中的爬片上，静置1h待用。 实验方法和内容： Patch-Clamp： 记录A-type K电流用电压钳，记录兴奋性用电流钳。 膜电位-60mV。 阻断剂孵育30min后开始记录。 Western blot: TAAR1在三叉神经元中的表达 造模后信号通路中蛋白表达水平的检测 Immunohistochemistry TAAR1在哪些三叉神经元中表达 TAAR1与NeuF,CGRP,IB4,NF200共表达 TAAR1通过哪些A-type K亚型发挥作用 TAAR1与KV4.1，KV4.2，KV4.3的共表 行为学 Von Frey测小鼠脸部的痛觉 Tyramine给药后痛觉行为学变化 TAAR1被干扰后的痛觉行为学变化 实验方法和内容： 实验结果与分析： 实验结果与分析： 实验结果与分析： 实验结果与分析： 实验结果与分析： 实验结果与分析：