荧光法研究曲克芦丁和.ppt

荧光法研究曲克芦丁和人血清白蛋白的相互作用;摘要：; 曲克芦丁(Troxerutin)是一种重要的黄酮类化合物,它是羟基芦丁中最重要的有效成分,医药上用于治疗静脉障碍血栓症及脑血管疾病。最近几年国外把曲克芦丁应用于防治长途飞行引起的微血管病，使曲克芦丁临床研究拓展到新的领域。药物进入体内一般都需要通过血浆的储存和运输来到达受体部位,发生药理作用。血清白蛋白是血浆中含量最丰富的载体蛋白,可与许多内源及外源性化合物结合。因此,研究药物与白蛋白的相互作用,具有重要的理论和现实意义。 ; 本文在模拟生理条件下,用荧光光谱法和紫外吸收光谱法,从分子水平上研究了曲克芦丁与人血清白蛋白(HSA)相互作用,并计算了其平衡常数及结合点位。根据能量转移机制计算了两者结合时的作用距离,推测了二者之间的主要作用力。 ;实验部分;实验方法; 荧光猝灭机理可分为动态猝灭和静态猝灭,动态猝灭是一种能量转移或电子转移过程,不影响蛋白质的结构和生理活性。静态猝灭则是由于发生了配合作用,通常是产生了不发荧光的配合物,对蛋白质的二级结构可产生影响,并可影响其生理活性。若猝灭过程为动态猝灭,则应符合Stern-Volmer方程：F0/F = 1 + Ksv[Q]　 (1) 式中:F0为未加猝灭剂时的荧光强度,F为加入猝灭剂后的荧光强度,[Q]为猝灭剂浓度,Ksv为Stern-Volmer动态猝灭常数,实验测定了HSA的荧光强度F0/F随曲克芦丁浓度的变化。由于生物大分子的最大的动态猝灭过程的速率常数Ksv100,因此猝灭速率常数大于100 L/mol的荧光猝灭过程为静态猝灭过程。结果见表1。 ;;求算曲克芦丁与HSA的结合数n、平衡常数K0;; 药物分子与血清白蛋白结合形成配合物,根据偶极-偶极非辐射能量转移理论即F0rster理论，可以求出结合位置与蛋白质分子中发荧光基团之间的距离r,距离越小,药物分子越有利于被蛋白质存储与转运,越能发挥其药理作用。 ; 将曲克芦丁的吸收光谱和人血清白蛋白的荧光光谱重叠部分见图2,参照文献[2]方法求得光谱的重叠积分J,进一步求得能量转移效率E,药物距色氨酸残基最短距离r,r均小于7 nm,说明药物容易被蛋白质携带,???挥其药力作用,药物与HSA作用过程发生了非辐射能量转移,两者形成了复合物。也进一步证明了药物对HSA的荧光猝灭属静态猝灭。见表3 ;HSA与曲克芦丁作用力的推测;讨论