药物分析 第四章—药物定量分析与分析方法验证.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。 专属性（specificity） 检测限（limit of detection， LOD） 检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。 是限度试验参数，无需定量测定。 常用方法: 用已知浓度被测物测定出能被可靠地检测出的最低浓度或量. 1.非仪器分析目视法: 当用GC和HPLC法时: 一般用 S/N=2 或 S/N=3 时的相应浓度或量确定检测限. S/N：它指音源产生最大不失真声音信号强度与 同时发出噪音强度之间的比率称为信号噪声比 越大越好 2.仪器分析时的测定方法 定量限（1imit of quantitation，LOQ） 指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度。 确定方法: 1、仪器分析 S/N=10 估算,并经配制相应浓度确认。 2、非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物试验出能被准确测定的最低浓度或量。 线性 在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度 直接呈正比关系的程度。 方法 作图法 回归方程 Y=aX+b(r=1) 标准溶液溶液浓度应包括一定梯度的5-8个浓度。 标准曲线应覆盖样品可能的浓度范围。 数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。 范围 指达到一定精密度、准确度和线性的条件下， 测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 原料和制剂含量测定范围应为测试 浓度的 80%-120%； 制剂含量均匀度检查范围应为测试浓度的 70%-130%； 耐用性 指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。 是评价其保持不受参数微小变差影响的能力. 验证项目 鉴别 杂检 含量测定 定量 限量 精密度 - + - + 准确度 - + - + 检测限 - - + - 定量限 - + - - 专属性 + + + + 线性 - + - + 范围 - + - + 耐用性 + + + + 不同分析方法对验证参数的要求 第四节 生物样品分析方法的基本要求 一、常用样品的种类、采集和贮藏 生物样品包括各种体液和组织，但实际上最常用的是比较容易得到的血液、尿液、唾液 （一）血液 （1）血浆 全血中加入抗凝剂（肝素、枸椽酸、草酸盐、EDTA等），经离心后取上清液。 （2）血清 全血不加抗凝剂，由血液中纤维蛋白原等影响下，引起血液凝结而析出的澄清黄色液体，离心后取上清液。 （3）全血 加入抗凝剂混匀，以防凝血。 （二）尿样 尿药测定主要用于药物剂量回收， 药物肾清除率、药物体内代谢几生物利用度研究，也可用于乙酰化代谢快、慢型测定等。 尿样浓度与血样浓度相关性差 （三）唾液 唾液中的药物浓度通常与血液浓度相关，可用唾液中的药物浓度来反应血浆浓度。 唾液的采集： 一般是在漱口后15分钟， 收集，离心后取上清液。 样品的储存 血浆和血清都必须在采血后即时分离。否则，血凝后冰冻保存，则因冰冻时引起细胞溶解，而阻碍血浆或血清的分出同时因溶血而影响药物浓度变化。 尿样宜立即测定，否则应加入防腐剂或低温冷藏。 二、生物样品分析前处理技术 微量药物存在于大量生物介质中，若直接进行测定，内源性物质可能干扰，药物浓度太低将会达不到仪器灵敏度要求。 因此，生物样品中的药物必须经过分离、纯化与浓集，必要时还需对待测组分进行化学改性处理，从而为最后测定创造良好的条件。 （一）蛋白质的去除 （二）缀合物的水解 尿中药物多呈缀合状态。一些含—OH，—COOH，—NH2，—SH的药物可与内源性物质葡萄糖或硫酸形成葡糖酸甘或硫酸缀合物。 （三）有机破坏 生物样品中的金属离子常与蛋白结合且难以用溶液萃取，同时金属离子可耐受较高温度。通常使用硝酸-高氯酸作为消解剂，本法破坏能力强，适用于各种生物样品的破坏。 （四）分离、纯化与浓集 液—液萃取 ( LLE) 亲脂性的药物与强极性的内源性水溶性物质，通过有机溶剂可以除去大部分干扰性物质。 注意： 1）所用溶剂对