产尿酸氧化酶基因工程菌的构建.PDFVIP

2009 6 7 6 　Central South Pharmacy.June 2009, Vol.7 No.6 1 1 1 1 2 1 ＊ 程新 , 张彦新 , 杨波, 刘栋 , 陈刚 , 蒋云生 (1 , 　410011;2. , 　400067 ) :　将尿酸氧化酶基因克隆到保加利亚乳酸杆菌 , 使之能产生尿酸氧化酶, 为开发能够分解尿酸、 对高 尿酸血症有治疗作用的可食用基因工程菌奠定基础。　根据genbank 上已知的产朊假丝酵母菌尿酸氧化酶基因 序列 (Uricase, E12709), PCR 扩增尿酸氧化酶基因片段, 将其插入质粒 pMG36e, 构建成重组质粒pMG36e-U, 电转化保加利亚乳酸杆菌, SDS鉴定基因工程菌体裂解液 的尿酸氧化酶, 测定尿酸氧化酶活性。　从 产朊假丝酵母基因组 PC R 扩增到尿酸氧化酶基因, 并构建成含有尿酸氧化酶基因的重组质粒pMG36e-U, 重组 质粒pMG36e-U 电转化保加利亚乳酸杆菌成功构建了含尿酸氧化酶的基因工程乳酸杆菌。 SDS测定基因工 程菌合成的尿酸氧化酶亚基分子量约为34 kD, 在体外测定菌酶液活性可达0.33 U ·mL-1 。　尿酸氧化酶基 因克隆入保加利亚乳酸杆菌 , 并具有酶分解能力。 :基因克隆;基因工程菌;尿酸氧化酶;乳酸杆菌 :R966　　　　:A　　　　:1672-29 1 (2009)06-0401-04 Construction of gene engineering bacterium to produce urate oxidase 1 1 1 1 2 1 ＊ CHENG Xin , ZH ANG Yan-xin , YANG Bo , LIU Dong , CHEN Gang , JIANG Yun-sheng (1.D ep ar tm en t of N ep hro logy , X iangy a S econd H osp ita l, Cen tra l S ou th Un iversity , Chang sha 4 10011;2.R esearch Cen ter of M ed ica l Chem istry Chem ica l B io logy Chong qing Techno logy B usin ess Un iversity , Chong qing 400067) Abstract:Objective　To clone urate oxidase gene into lactobacillus Bulgaria so as to produce urate oxidase, and to lay basis for the development of edible genetic engineering bacteria to treat hyperuricemia.Methods　According to gen- bank s know n candida utilis urate oxidase gene sequences (Uricase, E12709)in the genbank, PCR amplification of u- rate oxidase gene fragments was done and inserted into plasmid pMG36e to const ruct the recombinant plasmid pMG36e- U.Electrotransformation of lactobacillus Bulgaria, SDSanalysis of the urate oxidase in the genetic engineering cell lysate urate oxidase activity w ere done.Results　Genome w hich suspended animation production yeast