微生物厌氧菌的分离和培养方法.ppt

厌氧菌的培养方法 物理方法包括遮断空气法、煮沸法、真空法、空气置换法、气体喷射法或转管法等 化学方法包括焦性没食子酸法、铁丝绒法、保险粉法等 生物学方法包括与需氧菌共生好氧法、燕麦发芽法等 混合法包括厌氧罐（袋）法、厌氧手套箱法或厌氧室法、空气置换铁丝绒法、空气置换钯粒法等。 1 液体培养基的厌氧培养法 培养基煮沸：驱气后置流水中急速冷却 添加还原剂： 0.03～0.05％L-盐酸半胱氨酸 0.01～0.02％硫乙醇钠 0.5～1％葡萄糖 0.1％抗坏血酸 其它还原剂 添加琼脂 2 固体培养基的厌氧培养法 厌氧罐法 简易厌氧罐和厌氧袋法 钢丝绒法 焦性没食子酸法 抽气换气厌氧培养法 生物好氧厌氧培养法 转管技术和气体喷射培养法 厌氧手套箱法 （又称厌氧室法） 2.1 Gas-pak法 原理 气体发生袋： 柠檬酸和碳酸氢钠 ＋H2O CO2 硼氢化钠 ＋H2O H2 触媒 ： 钯粒 H2O 厌氧罐中的O2 厌氧指示剂 厌氧指示剂 亚甲基兰 指示剂 卢卡斯固体厌氧指示剂 布鲁氏指示剂 亚甲基兰 指示剂 6％葡萄糖水溶液 2 0.1N氢氧化钠水溶液 0.1 0.05％亚甲基兰水溶液 0.2 厌氧 无色 残存有氧气 蓝色 卢卡斯固体厌氧指示剂 2％硼砂溶液 5毫升 9％硫乙醇酸 1毫升 酚红溶液 0.1～0.2毫升 0.02％美兰溶液 10毫升 琼脂 1％ 厌氧 无色 残存有氧气 蓝色 布鲁氏指示剂 60％羟甲基氨基甲酯 1 4％葡萄糖 1 0.02％美蓝 1 厌氧 无色 残存有氧气 蓝色 Gas-Pak法的使用操作程序 平皿培养基装入平皿架中置厌氧罐内； 打开内盖居中金属网袋，装入触媒钯粒； 打开锡箔纸袋，取出厌氧指示剂片； 剪开气体发生袋一角，注入10毫升水，迅速紧闭罐盖，置培养箱中培养。 约经5～10分钟后，放入厌氧指示剂片。 注：操作较复杂，需注入水作为触媒。 2.2.1 简易厌氧罐 干燥器容内径（厘米） 容器1 容器2 容器3 容积（毫升） 硼氢钠 氯化钴 0.2克 柠檬酸0.6克 15cm（约2150毫升） 或 和 0.6克 钯粒1.5克 碳酸氢钠0.7克 18cm（约3500毫升） 硼氢钠 氯化钴0.33克 柠檬酸1克 或 和 1克 钯粒2克 碳酸氢钠1.15克 2.2.2 厌氧袋法 (三菱瓦斯化学株式会社) 聚碳酸酯（复合塑料膜）制厌氧袋 产气袋：2.5L、3.5L、350ml； 厌氧指示剂 厌氧培养罐：2.5L、7L、15x