微生物检查基本技术.ppt

实验室设施 开展无菌检查及微生物限度检查工作，首先要按照《药品检验所实验室质量管理规范》及《药品生产质量管理规范》的要求，建立一个布局合理、使用方便、操作安全的无菌室，并且配有完善的实验设施和管理制度。无菌检查、微生物限度检查以及接种室（接种对照菌、菌种传代）均应严格分开，具有危险性的毒株、毒素如破伤风梭菌、黄曲霉毒素的实验室需单独使用，以便控制防止传播。 洁净室 一般应该具备核心操作区、缓冲区、更衣区、阳性对照操作区等区域 实验室应该根据洁净室的特点，制订并执行洁净室的使用、维护、验证标准操作规程 为避免交叉污染，无菌检查的洁净室宜单独设置，单独使用 洁净室的使用 在实验开始之前1小时启动风机系统（空调系统），并开启空气消毒装置，消毒至少半小时后关闭 观察并确保洁净室的压差 物品经物流通道进入洁净室 人员正确着装后经人流通道进入洁净室 使用完毕，应用消毒液清洁工作台面。实验人员在更衣室换下无菌工作衣后出洁净工作室。开启空气消毒装置，消毒至少半小时后，关闭洁净工作室的控制开关。 洁净室的维护 系统维护 过滤器的清洗更换：每月清洗净化空调系统的新风口和初效空气过滤器；每季度更换净化空调系统的中效过滤器；每年更换单向流区域的高效空气过滤器，并视洁净室验证结果，选择更换其他区域内的高效空气过滤器。 风机系统的维护：每半年检查送风风机和排风风机的各项指标，视情况更换风机涡轮轴承。 空调系统的维护：每年夏、冬两季之初，对空调机组进行维护，重点是压缩机保养、制冷剂补充和远程控制系统验证。 洁净室内压力梯度的维护：每半年调试洁净室内各区域间的压力梯度，确保正压房间对相邻房间有正压，负压房间对相邻房间有负压。 清洁维护 洁净室的清洁维护分为日常维护、定期维护和不符合时的维护。 日常维护由每次实验的实验人员进行，维护的范围为进行实验的洁净工作室和辅助洁净区，维护的频率为每次实验后。 定期维护由实验室指定专人进行，维护的范围为所有洁净工作室，维护的频率为每二周一次。 不符合时的维护由实验人员进行，维护的范围为所有不符合的洁净室，维护的时机为出现不符合时。 洁净室的验证 验证的项目：洁净度、微生物数、换气次数、静压差、照度、温度、相对湿度 验证的技术要求 验证的周期 建议每年至少一次，也可根据洁净室的使用频率适当增加验证次数 验证的方法 洁净度和微生物数：采用GB/T16292~16294-1996 其他项目：参照GB50591、GB50457 验证不符合项的处理 当洁净度、微生物数、换气次数、静压差等指标出现不符合时，应停用洁净室，对净化系统进行调整后，在重新验证，直至符合规定才能重新启用洁净室 当温度、相对湿度和照度等指标出现不符合时，洁净室可不必停用，但应及时修复空调系统（或更换照明装置），使其符合规定 目录 一、药品无菌检查的环境 应该在洁净度为10000级，局部100级的单向流空气区域内 检查的全过程，应该遵守无菌操作，避免微生物污染，检查的环境应该能够提供这种保障 检查的单向流空气区域、工作台面和环境应该定期验证 环境的压差、温度、湿度、要照度都要一定要求 一、药品微生物限度检查 1、几个名词解释 （1）微生物的概念 所谓微生物是一群个体微小、结构简单肉眼不能直接看到，必须借助显微镜以及其它手段才能辨别的微小生物。 （2）菌落 一般是指在固体培养基上，由细菌单细胞经过适宜温度培养在一个局部位置上，繁殖而成的可见菌体细胞群。 （3）无菌技术 无菌技术主要指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施，其中包括无菌环境设施，无菌实验器材以及无菌操作等统称为无菌技术。 （4）消毒 消毒是指杀灭病因微生物的繁殖体，但杀不死芽孢等全部微生物。 常用的清毒剂的种类 75%乙醇、甲醛、碘酊、0.1%新洁尔灭、乳酸、过氧乙酸、3%来苏尔、过氧化氢等。 （5）灭菌 凡能杀灭物体中所有微生物繁殖体及芽孢或孢子的作用称为灭菌。 常用的灭菌方法 (5．1)干热灭菌法 (5．2)湿热灭菌法 （6）微生物限度检查法定义 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵菌数及控制菌检查。 （6．1）操作环境 微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检查全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净验证。 （6．2） 培养温度和时间