激活蛋白1对香烟烟雾提取物诱导气道黏蛋白5AC基因表达的调控作用.PDF

中南大学学报（医学版） 　２０１０，３５（１１）　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｘ．ｘｙｓｍ．ｎｅｔ １１５０ ＪＣｅｎｔＳｏｕｔｈＵｎｉｖ（ＭｅｄＳｃｉ） 激活蛋白１对香烟烟雾提取物诱导气道 黏蛋白５ＡＣ基因表达的调控作用 余红梅，周向东 （重庆医科大学附属第二医院呼吸内科，重庆 ４０００１０） ［摘要］　目的：了解激活蛋白１（ＡＰ１）参与调控香烟烟雾诱导的气道黏蛋白（ＭＵＣ）５ＡＣ表达的作 用机制，探讨此过程中ＡＰ１活化的可能信号途径。方法：体外培养人气道上皮细胞 ＢＥＡＳ２Ｂ，给予香烟 烟雾提取物（ＣＳＥ）刺激，干预实验用 ｃＪｕｎ的显性负性突变体 ＴＡＭ６７转染细胞阻断 ＡＰ１的 ＤＮＡ结合 活性；用 ＳＰ６００１２５和 ＰＤ９８０５９预处理分别阻断ｃＪｕｎ氨基端激酶（ＪＮＫ）和细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ） 的活性。以ＥＬＩＳＡ法检测 ＭＵＣ５ＡＣ蛋白含量，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测磷酸化 ＪＮＫ（ｐＪＮＫ）、磷酸化 ＥＲＫ（ｐ ＥＲＫ）和磷酸化 Ｐ３８（ｐＰ３８）含量，ＲＴＰＣＲ检测ＭＵＣ５ＡＣｍＲＮＡ表达水平，ＥＭＳＡ测定 ＡＰ１的 ＤＮＡ结 合活性。结果：ＣＳＥ（１ｇ／Ｌ）刺激后 ＭＵＣ５ＡＣｍＲＮＡ表达水平和蛋白含量明显高于对照组（均Ｐ＜０．０１）， ＡＰ１的 ＤＮＡ结合活性也明显强于对照组（Ｐ＜０．０１），伴随ｐＥＲＫ和 ｐＪＮＫ蛋白含量显著增加，与对照 组相比，差异有统计学意义（均Ｐ＜０．０１），而 Ｐ３８含量无明显变化（Ｐ＞０．０５）；与 ＣＳＥ组相比，ＴＡＭ６７ 转染细胞后 ＭＵＣ５ＡＣｍＲＮＡ表达水平和蛋白含量均显著降低 （Ｐ＜０．０１）；与 ＣＳＥ组相比，用 ＳＰ６００１２５ 或 ＰＤ９８０５９处理细胞后可明显抑制 ＡＰ１的 ＤＮＡ结合活性 （均 Ｐ＜０．０５），并下调 ＭＵＣ５ＡＣ蛋白含量 和 ｍＲＮＡ的表达（均Ｐ＜０．０５）。结论：ＡＰ１参与调控 ＣＳＥ诱导的气道 ＭＵＣ５ＡＣ基因表达的过程，此过 程是由ＪＮＫ和 ＥＲＫ信号转导通路激活 ＡＰ１，再由ＡＰ１与 ＭＵＣ５ＡＣ启动子上 ＡＰ１ＤＮＡ反应元件结合 后在转录水平上调 ＭＵＣ５ＡＣ的表达而实现的。 ［关键词］　 香烟烟雾；　黏蛋白；　激活蛋白１ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２７３４７．２０１０．１１．００６ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｔｉｖａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ１ｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆＭＵＣ５ＡＣｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅｅｘｔｒａｃｔ ＹＵＨｏｎｇｍｅｉ，ＺＨＯＵＸｉａｎｇｄｏｎｇ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００１０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｔｉｖａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ１（ＡＰ１）ｏｎｃｉｇａ ｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅｉｎｄｕｃｅｄａｉｒｗａｙｍｕｃｏｕｓｈｙｐｅｒｓｅｃｒｅｔｉｏｎａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐｏｓｓｉｂｌｅｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｔｈａｔａｃｔｉｖａｔｅｓＡＰ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅａｉｒｗａｙｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ（ＢＥＡＳ２Ｂ）ｗａｓｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎ ｖｉｖｏａｎｄｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅｅｘｔｒａｃｔ（ＣＳＥ）．ＴｈｅＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＡＰ１ｗａｓｂｌｏｃｋｅｄ ｂｙｔｈｅ