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2018-02-08 发布于上海
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fgf-1对人甲状腺癌细胞中hmga1表达的影响及其机制初步研究word论文

FGF-1对人甲状腺癌细胞中HMGA1表达的影响及其机制初步研究硕士研究生：卢盼导师：曹仁贤教授祖旭宇副教授中文摘要目的：观察FGF-1 对人甲状腺癌细胞中HMGA1 表达的影响，并初步探讨PI3K/AKT通路在FGF-1 调控HMGA1表达过程中的作用。方法：以体外培养的人甲状腺癌细胞SW-579为研究对象，分别以不同浓度的FGF-1处理SW-579细胞，应用RT-PCR、实时定量PCR、免疫荧光法检测HMGA1 mRNA以及蛋白的表达。同时应用RT-PCR、实时定量PCR、免疫荧光法检测以25ng/mL和35ng/mLFGF-1分别处理人甲状腺癌细胞后不同时间HMGA1 mRNA 及蛋白的表达。应用荧光素酶报告系统分析FGF-1对转染入人甲状腺癌细胞中HMGA1 启动子活性的影响。为了进一步研究FGF-1 调控人甲状腺癌细胞HMGA1的机制，用PI3K/AKT通路抑制剂（LY294002和Wortmannin）处理细胞，应用RT-PCR和免疫荧光法检测SW-579细胞经FGF-1刺激后HMGA1 mRNA 和蛋白的表达。结果：1）RT-PCR结果显示：不同浓度FGF-1 处理甲状腺癌细胞后，与对照组相比，15ng/mL、25ng/mL、35ng/mLFGF-1组甲状腺癌细胞中HMGA1mRNA 均明显升高(p0.05)，而5ng/mLFGF-1 组无明显改变。FGF-1 处理甲状腺癌细胞不同时间后，与对照组相比，FGF-1 处理3 小时、6 小时、9 小时、12 小时后甲状腺癌细胞中HMGA1mRNA 均升高(p0.05)，但各组之间的差异无统计学意义(p0.05)。PI3K抑制剂处理甲状腺癌细胞后，与对照组相比，FGF-1组HMGA1 mRNA水平升高(p0.05)，与FGF-1组相比，PI3K通路抑制剂组甲状腺癌细胞HMGA1mRNA水平下降(p0.05)。2）实时定量PCR显示：不同浓度FGF-1 处理甲状腺癌细胞后，与对照组相比，25ng/mL、35ng/mLFGF-1 组甲状腺癌细胞2中HMGA1 mRNA增加(p0.05)，但5ng/mL、15ng/mLFGF-1 组的升高无统计学意义(p0.05)。FGF-1处理甲状腺癌细胞不同时间后，与对照组相比，FGF-1处理甲状腺癌细胞6 小时、9 小时、12 小时后，其HMGA1 mRNA增加(p0.05)，但组内的差异无统计学意义(p0.05)。3）荧光素酶报告系统显示：不同浓度FGF-1 处理甲状腺癌细胞后，与对照组相比，其HMGA1启动子活性在15ng/mL、25ng/mL、35ng/mLFGF-1组均升高(p0.05)，各组内的差异无统计学意义(p0.05)，而5ng/mLFGF-1 组HMGA1启动子活性无明显变化。FGF-1 处理甲状腺癌细胞不同时间后，与对照组相比，FGF-1 处理6 小时、9 小时、12 小时后甲状腺癌细胞中HMGA1 启动子活性均升高(p0.05)，且以9 小时、12 小时组升高最明显(p0.05)。4）免疫荧光结果显示：不同浓度的FGF-1处理甲状腺癌细胞后，荧光所标记的HMGA1蛋白主要分布在细胞核，与对照组相比，加入FGF-1 后，甲状腺癌细胞核中HMGA1蛋白均增加。FGF-1 处理甲状腺癌细胞不同时间后，与对照组相比，FGF-1 处理3 小时、6 小时、9 小时、12 小时后甲状腺癌细胞核中HMGA1蛋白均增加。PI3K抑制剂处理甲状腺癌细胞后，荧光所标记的HMGA1蛋白主要分布在细胞核，与空白组相比，FGF-1组甲状腺癌细胞核的HMGA1蛋白增加，与FGF-1组相比，PI3K通路抑制剂组甲状腺癌细胞核HMGA1 蛋白明显减少。结论：1）FGF-1能上调人甲状腺癌细胞中HMGA1mRNA和蛋白水平。2）PI3K/AKT信号通路参与调节FGF-1 上调HMGA1 表达。关键词：高迁移率族蛋白A1；成纤维生长因子1；甲状腺癌；磷脂酰肌醇-3 激酶3EffectofFGF-1onTheExpressionofHMGA1inThyroidCancerandPreliminaryMechanismResearchAbstractObjective:ToinvestigatetheeffectofFibroblastgrowthfactor1(FGF-1)onthe expressionofHMGA1inthyroidcancercells,andtoexploretheroleofPI3K/AKT signalingpathwayin theregulation of HMGA1 byFGF-1.Methods:SW-579celllinesculturedinvitrowereutilizedinourstudytoexplore