gⅱ-4型诺如病毒p粒子的表达及其与组织血型抗原结合的初步研究word论文.docxVIP

主要英文缩略语索引英文缩写号 英文全称 中文全称Amp Ampicilin 氨苄青霉素AP Ammonium Persulfate 过硫酸铵EIA Enzyme immunoassay 酶免疫分析GSH glutathione 谷胱甘肽GST glutathione s-transferase 谷胱甘肽 S 转移酶 HBGAs Histo-Blood Group Antigens 组织血型相关抗原 HuCV Human Caliciviruses 人类杯状病毒IEM immunoelectron microscopy 免疫电镜方法IPTG Isopropylβ-D-Thiogalactopyranoside 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷NLV Norwalklike Virus 诺瓦克样病毒NV Norwalk Virus 诺瓦克病毒NVs Norovirus 诺如病毒PBS pHospHate buffer solution 磷酸盐缓冲液PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应SDS dodecyl sulfate,sodium salt 十二烷基硫酸钠SLV Sapporo like Virus 札幌样病毒SRSV Small Rounel Structural Viruses 小圆结构病毒TEMEDN,N,N,N-TetramethylethylenediamineN,N,N,N-四甲基乙二胺 VLPVirus-like particle病毒样颗粒IIIGⅡ-4 型诺如病毒 P 粒子的表达及其与组织血型抗原结合的初步研究研究生：张翠红导师：封少龙副教授段招军研究员专业：劳动卫生与环境卫生学中文摘要目的：克隆诺如病毒（NVs）GⅡ-4型1991年至今五个不同年代变异株的P区基因， 并表达、纯化其蛋白，即P粒子；通过分析不同P粒子与其受体——人组织血型相 关抗原（HBGAs）之间的结合模式，以确定GⅡ-4诺如病毒感染的宿主范围，为 防治GⅡ-4诺如病毒的感染提供科学数据。方法：选取五株不同年代GⅡ-4型诺如病毒变异株，分别克隆其ORF2区，以此为基础扩 增P区并与PGEM-Teas y载体 相连，得到重 组 质粒PGEM-Teas y- P。之后用 BamH I 和 Not I 双酶切 将 P 区 基 因 切 下 连 接 至 PGEX-4T-1 表 达 载 体 ， 得 到 PGEX-4T1-P表达质粒。利用GST原核表达系统经IPTG诱导、超声破碎细胞后表 达P蛋白（此时带有GST蛋白标签）。利用琼脂糖凝胶4B对P蛋白进行纯化并用 thrombin凝血酶去除GST标签以形成二十四聚体的P粒子。利用制备成功的P粒子、 实验室现有的GⅡ-4型诺如病毒免疫家兔的血清，及从深圳收集的117份唾液标 本，用酶免疫分析试验（EIA）测定五株变异株的P粒子与受体组织血型相关抗 原（HBGAs）之间的结合模式。1结果：1. 成功构建了五株GⅡ-4型诺如病毒的PGEX-4T1-P表达质粒。2. 制备了五株GⅡ-4型诺如病毒变异株的P粒子，大小为38KDa。3. 测定了五株GⅡ-4型诺如病毒变异株P粒子与受体HBGAs之间的结合模式， Camberwell株、95/96 US株和2006b株与A型、B型、O型分泌型（O+）唾液结合， 与O型非分泌型（O-）不结合，Hunter 株和Sakai株与A型、B型、O+型、O-型唾 液均不结合。结论：HBGAs与GⅡ-4型诺如病毒P粒子的结合呈现毒株特异性结合，Camberwell 株、95/96 US株和2006b株与A型、B型、O型分泌型（O+）唾液结合，与O型非 分泌型（O-）不结合，Hunter 株和Sakai株与A型、B型、O+型、O-型唾液均不结 合。关键词：GⅡ-4 诺如病毒；P 粒子；组织血型相关抗原2Expressing the P Particles of GⅡ-4 Norovirus and TheirBinding to Human Histo-Blood Group Antigens AbstractObjective:Cloned the P domains gene of GⅡ-4 norovirus five strains since 1991, prepared the P particles according to expressing and purifying the P proteins. The binding patterns were determined by EIA experiments between the different P particles andthe histo-blood gro