hsp27通过pi3k-pkcζ-sp1信号通路促进abca1表达和胆固醇流出word论文.docxVIP

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2018-02-08 发布于上海
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hsp27通过pi3k-pkcζ-sp1信号通路促进abca1表达和胆固醇流出word论文.docx

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hsp27通过pi3k-pkcζ-sp1信号通路促进abca1表达和胆固醇流出word论文

PCR RXR RCTRT-PCRTR VLDLRPolymerase chain reaction Retinoid X receptorReversecholesterol transport Reversetranscription polymerase chain reactionThyroid hormonereceptor Verylow-densitylipoprotein receptor聚合酶链反应视黄醛X受体胆固醇逆向转运逆转录聚合酶链反应甲状腺激素受体极低密度脂蛋白受体2HSP27通过PI3K-PKCζ-Sp1信号通路促进ABCA1表达和胆固醇流出研究生：匡海军导师：唐朝克教授曾高峰主任医师专业：心血管内科中文摘要目的：本实验主要观察HSP27对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达和细胞内胆固醇流出的影响，并探讨其相关机制。方法：将THP-1 细胞中加入佛波酯，同时用ox-LDL孵育使之转变成泡沫细胞，并加入HSP27（不同浓度）以及siRNA即小分子干扰RNA等因素处理后，采用Westernblot和半定量RT-PCR检测ABCA1 蛋白质的表达和mRNA表达，采用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇，游离胆固醇和胆固醇酯含量，使用液体闪烁计法检测细胞内胆固醇流出。以PI3K抑制剂或PKCζ阻断剂或SP1抑制剂对HSP27 作用下的细胞共处理24 小时，观察对ABCA1表达的影响。不同形式HSP27处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24h，Western blot检测HSP27对PKCζ 和SP1 磷酸化水平的影响。结果：HSP27上调ABCA1的表达，增加细胞内胆固醇流出，从而减少细胞内脂质蓄积；3D HSP27增加PI3K磷酸化，逐步激活PKCζ-SP1 磷酸化，从而上调ABCA1的表达以及细胞内胆固醇流出；HSP27 通过PI3K-PKCζ-SP1 信号通路促进ABCA1 mRNA 和蛋白的表达；THP-1 巨噬细胞源性泡沫细胞中3D HSP27 可激活PI3K-PKCζ-SP1 信号途径。结论：HSP27 通过PI3K-PKCζ-Sp1 信号通路上调ABCA1表达及细胞内胆固醇流出，可能发挥抗As 的作用。3关键词：热休克蛋白-27，三磷酸腺苷结合盒转运体A1，胆固醇流出，PI3K-PKCζ-Sp1，动脉粥样硬化。4HSP-27up-regulatesABCA1expressionandcholesteroleffluxbythePI3K-PKCζ-Sp1signalingpathwayinTHP-1macrophagederivedfoamcellsABSTRACTObjective:ThisstudywastoinvestigatethechangeofABCA1mRNAandprotein expressionandcholesteroleffluxin THP-1macrophagederivedfoamcellsafter treated byHSP27 and todiscover thecombinedeffects and mechanisms in foam cells.Methods:Inthepresentstudy,theadherentofTHP-1cellswasinducedbyphorbol ester.Whiletoformfoamcell,weincubateTHP-1cellwithoxLDL.What’smore,to findoutwhetherHSP27hadaninfluenceonfoamcells,wetreatedfoamcellswith HSP27indifferentconcentrationandsmallinterferingRNA(siRNA).Totracethe alterationoffoamcells,wequantifythespecificABCA1mRNAbyreal-timePCR, alsowetesttheexpressionproteinwithWesternBlotting.UsingLiquidscintillation countingandhighperformanceliquidchromatographyassays,wedetectedthe cellularcholesterolefflux,cellulartotalcholesterolcontent,freecholesteroland cholesterolestercontent.Ourexperimentalsousedthreedifferentkindofinhibitor, PI3K,PK