hsp70入核与parp-1结合在肝缺血再灌注损伤中的保护作用word论文.docxVIP

HSP70入核与PARP-1结合在肝缺血再灌注损伤中的保护作用研究生：张晓宁导师：张劭副教授中文摘要目的:通过建立大鼠热休克及肝脏缺血再灌注模型，研究HSP70进入细胞核与PARP-1结合，在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用。方法:选择健康的雄性SpragueDawley(SD)大鼠，体重在180g-250g之间，随机分为5组：HSP70抑制组（H-/P+组），通过槲皮素抑制HSP70的高表达；阴性对照组（NC组）；热休克组（H+/P+组），通过热休克促进HSP70的高表达；阳性对照组（PC 组）即肝脏缺血再灌注组，Pringle法建立肝脏缺血再灌注模型；PARP-1抑制组（H+/P-组），通过3-AB抑制PARP-1的表达。各组造模成功后取肝脏组织及血液样本，分析各组大鼠血生化指标改变，Western blot分析HSP70与PARP-1的表达情况，免疫共沉淀分析HSP70与PARP-1的结合情况，肝脏标本HE染色观察组织形态学改变。结果采用专业图像分析软件进行分析，用SPSS18.0软件进行统计分析。结果:1.用自动生化仪检测血清学标本，统计软件分析结果示各个组相互比较均有显著性差异，P0.01，有统计学意义。PC组血清ALT值最高，与其余各组比较有显著性差异，P0.01；H+/P+组与H-/P+组、H+/P-组比较有显著性差异，P0.01，血清ALT值较低；H-/P+组与H+/P-组比较血清ALT值高，有显著性差异，P0.01；表明细胞核中HSP70与PARP-1均可发挥肝功能保护作用，HSP70对肝功能的保护作用强于PARP-1。2.通过提取细胞核中HSP70行Westren blot检测，证实HSP70进入细胞核中，且明确了各处理组中HSP70的表达情况。统计分析示：H+/P+组与H+/P-组3比较无显著性差异，P0.05；H-/P+组与PC组比较无显著性差异，P0.05；H+/P+组、H+/P-组与其他组比较，Hsp70的表达增高，有显著性差异，P0.01；NC组与其余组比较均有显著性差异，P0.01，只有少量Hsp70的表达；表明热应激、缺血再灌注损伤均可促进HSP70表达，槲皮素起到了抑制HSP70的表达。.提取细胞核中PARP-1行Westrenblot检测，统计分析各组PARP-1表达情况：H+/P+与其余组比较有显著性差异，P0.01，表达明显增多；H-/P+组与PC组、NC组及H+/P-比较有显著性差异，P0.01，PARP-1表达增多；H+/P-组与 PC组、NC组比较PARP-1表达量多，有显著性差异，P0.01；PC组与NC组比较有显著性差异，P0.01；表明热休克及缺血再灌注损伤均促使细胞核PARP-1的表达，3-AB达到了抑制PARP-1的过表达。.免疫共沉淀检测：提取各组大鼠肝脏细胞核蛋白，分别用PARP-1、HSP70 抗体免疫沉淀，再行Western blot分析，结果示：在70kDa和29kDa处各出现一条带，为HSP70和PARP-1蛋白，证实了细胞核中HSP70与PARP-1复合物的存在。表明了在热休克及缺血再灌注损伤等应激时，HSP70进入细胞核中与PARP-1 结合。5.HE染色结果显示：NC组（空白对照组）肝小叶结构基本正常，肝小叶中央静脉、肝窦结构清晰可见，汇管区无明显的中性粒细胞浸润，肝窦无明显淤血； PC组（缺血再灌注组）肝细胞明显肿胀，肝窦狭窄、淤血，肝小叶中央静脉淤血，肝细胞索及肝窦分界不清，汇管区见中性粒细胞浸润；H-/P+组（HSP70抑制组）、H+/P-组（PARP-1抑制组）及H+/P+（热休克组）肝细胞损伤病理改变介于NC组与PC组之间。结论:1.热应激、缺血再灌注损伤促进细胞HSP70与PARP-1的表达；2.HSP70进入细胞核与PARP-1蛋白结合，发挥肝细胞保护作用；3.抑制PARP-1的表达可减少细胞凋亡；关键词:HSP70；PARP-1；肝；缺血再灌注损伤。4HSP70intotheNucleuscombinedwithPARP-1protectioninhepaticischemia-reperfusioninjuryABSTRACTObjective:Throughtheestablishmentofheatshockandhepaticischemia-reperfusionmodelto studytheroleofHSP70intothenucleusbindingwithPARP-1intermsofhepatic ischemia-reperfusion.Methods:Choosehealthymale(SpragueDawleySD)rats,weighingbetween180g-250g,were randomlydiv