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JQ1 诱导 SUP-B15 细胞凋亡的 Notch1 通路机制研究摘要目的：费城染色体阳性(Ph+)急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是 起源于淋巴祖细胞并且在第22对染色体长臂和第9对染色体长臂相互易位后产生了 BCR-ABL融合的致癌基因的肿瘤性疾病。Ph(+)ALL属于危险度分层较高的急性白血 病，它的特点是缓解率较Ph(-)ALL低，缓解后复发时间短，预后不好。患者随着长期 的化疗疾病缓解率可能会降低，缓解时间逐渐缩短，患者的身体长期无法耐受化疗所 带来的副作用，比如感染、免疫力低下等。伴随着酪氨酸激酶抑制剂第一代产品针对 BCR-ABL 融 合 致 癌 基 因 靶 向 治 疗 药 物 的 出 现 ， 治 疗 慢 性 髓 细 胞 白 血 病 (chronic myelocytic leukemia,CML)上取得了惊人的效果，使CML这个疾病从难以治疗的疾病 变为存活期较长的疾病之一，之后该药物也用于治疗Ph+ALL上，同样大大提高了该 疾病的缓解率，然而在临床用药的过程中逐渐出现了耐药情况，于是酪氨酸激酶抑制 剂第二代产品也出现，但对于一些基因的突变效果不令人满意。异基因造血干细胞移 植可能只有少数患者可以接受移植。因此，寻找有效一种特效的 细胞毒药物十分迫 切。近年来国外研究发现JQ1(溴结构域蛋白抑制剂）可抑制慢性髓细胞白血病 (CML)BCR-ABLT315I基因突变细胞的增殖，而研究发现CML慢性期转变为急性期是 由于MSI2过度表达激活了MSI2-Numb-Notch1的通路。Ph+ALL也具有与CML相似 BCR-ABL融合基因。那么JQ1是否对Ph+ALL细胞有抑制作用，JQ1能否通过下调 MSI2-Numb-Notch1通路达到抗肿瘤的作用，该研究国内外未见报道。本研究通过体 外实验的方法观察JQ1对人Ph+ALL细胞株SUP-B15细胞的凋亡诱导作用及对Notch1 通路上MSI2、Notch1、Hes1基因的影响,探讨JQ1治疗Ph(+)ALL中可能的抗肿瘤机制， 为临床医生在Ph(+)ALL的治疗提供新的治疗方向。方法：1.不同浓度单药 JQ1 作用 SUP-B15 细胞株 24h、48h、72h，实验采用四甲基偶氮唑蓝法试验（MTT 法)检测的细胞生长抑制情况。2.不同浓度单药 JQ1 作用 SUP-B15 细胞 48h,实验采用流式细胞术检测细胞周期 的改变。3.不同浓度单药 JQ1 作用 SUP-B15 细胞株，实验采用实时荧光定量聚合酶链反 应(RT-PCR)法检测 MSI2、Notch1、Hes1、Bcr-AblmRNA 的表达水平。结果：1.实 验 采 用 四 甲 基 偶 氮 唑 蓝 （ MTT ） 法 检 测 结 果 的 说 明 ： 不 同 浓 度 单 药 的 JQ1(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L)和 SUP-B15 细胞一起培养 24h、48h、72h 后，SUP-B15 细胞生长有明显的抑制现象。在 0-4μmol/L 的浓度范围内,JQ1 实验组的细胞生长抑制 率会随着 JQ1 药物浓度的升高和作用时间延长而升高，呈现剂量-时间依赖性。与对 照组比较，在相同时间下，差异有统计学意义(P 0.05)。2.实验采用流式细胞术检测 SUP-B15 细胞周期的结果说明：与对照组相比，不 同浓度单药的 JQ1（1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L）作用 SUP-B15 细胞 48h 后，可以 诱导细胞阻滞在 S 期，呈剂量依赖性。与对照组比较，在相同时间下，差异有统计学 意义（P 0.05)。3.实验采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测的结果说明：不同浓 度单药的 JQ1（1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L）作用 SUP-B15 细胞 48h 后，随着 JQ1 浓度增加，MSI2、Notch1、Hes1、Bcr-AblmRNA 的表达水平逐渐减少，呈剂量依赖 性，在相同时间段，与对照组比较，差异有统计学意义（P 0.05）。结论：1.JQ1 可以明显抑制 SUP-B15 细胞的生长，可以有效诱导 SUP-B15 细胞的凋亡。2.JQ1 可以使 SUP-B15 细胞在细胞的 S 期被阻滞，呈剂量依赖性，从而影响细胞 的生长。3.JQ1 可以使 Notch1 信号通路中关键基因 MSI2、Notch1、Hes1 的转录水平逐渐减少并呈剂量依赖性，说明 JQ1 对 Ph+ALL 细胞株 SUP-B15 细胞生长抑制可能是通过下调 Notch1 信号通路来完成的,该机制是 JQ1 抗肿瘤机制之一。关键词：JQ1；SUP-B15 细胞株；细胞周期；MSI2；Notch1；Hes1Mecha