klf2rela比例失衡对中性粒细胞性哮喘豚鼠中性粒细胞凋亡的影响word论文.docxVIP

PVDFpolyvinylidene fluoride聚偏二氟乙烯rpmrevolution per min每分钟转速RT-PCRreversetranscription-polymeraseChain reaction逆转录-聚合酶链反应SDSsodium dodecyl sulfate十二烷基硫酸钠TBSTTween20/ Tris-buffered Saline吐温20/Tris缓冲盐溶液 TEMEDtetramethylethylenediamine四甲基乙二胺TrisTris(hydroxymethyl)aminomethane三(羟甲基)氨基甲烷- 2-KLF2/RelA比例失衡对中性粒细胞性哮喘豚鼠中性粒细胞凋亡的影响研究生李海银导师朱黎明教授中文摘要目的：通过观察中性粒细胞性哮喘豚鼠中性粒细胞中肺Krüppel样转录因子（KLF2）、RelA、Bcl-xl的表达情况，初步探讨KLF2和RelA在中性粒细胞性哮喘中性粒细胞凋亡中的作用及参与机制，为哮喘的防治提供新的思路。方法：观察各组豚鼠雾化激发后体征变化及HE染色后支气管肺组织病理改变并比较各组豚鼠气道阻力变化及支气管肺泡灌洗液(brochialalveolar lavagefiuid，BALF)细胞总数和分类计数；采用流式细胞术方法检测血中中性粒细胞凋亡率及RT-PCR方法检测支气管肺泡灌洗液中炎性细胞和血中性粒细胞中KLF2与RelAmRNA表达情况；采用Westernblot检测血中性粒细胞中KLF2、RelA 和Bcl-xl蛋白质表达水平。结果:(1) 豚鼠气道阻力测定：B组豚鼠对乙酰甲胆碱的气道反应性随着吸入浓度的升高而增加，各浓度水平的气道阻力与A组相比均显著增高（P0.01)。C组豚鼠各浓度气道阻力水平较B组降低（P0.05)。(2) 豚鼠哮喘症状观察结果：OVA雾化期间B组豚鼠出现明显的呼吸急促、咳嗽、打喷嚏、腹肌抽搐等典型哮喘症状，C组豚鼠也出现上述症状但明显减轻。A 组无上述症状。(3) 肺组织病理学检查结果: A组豚鼠病理学检查示支气管及肺组织结构正常、支气管黏膜上皮完整、少见炎性细胞。B组支气管管腔狭窄、黏膜上皮脱落、炎症细胞浸润典型的哮喘病理学改变。C组支气管黏膜仍有较明显的水肿，但管周炎症细胞浸润较B组明显好转。(4)B组豚鼠BALF中细胞总数及中性粒细胞所占比例显著高于A组（细胞总数105.75±12.36VS37.25±9.37,N%18.97±4.59(%)VS4.28±0.95(%),- 3-P0.01),C组豚鼠BALF细胞总数及中性粒细胞比例较B组明显降低（细胞总数58.72±10.98VS105.75±12.36,N%11.75±2.51(%)VS18.97±4.59(%),P0.01)。(5)流式细胞术结果：A组豚鼠血中中性粒细胞早期凋亡率为12.21±2.79（%），B组豚鼠较A组显著降低(2.68±1.25(%)VS12.21±2.79（%）,P0.01),C 组豚鼠凋亡率较B组增高(5.30±1.63(%)VS2.68±1.25(%),P0.05)但仍低于A组。B组豚鼠血中性粒细胞中Bcl-xl蛋白表达水平（0.50±0.12VS0.82± 0.14）比A组显著降低(P0.01),而C组豚鼠血中性粒细胞中Bcl-xl蛋白表达水平（0.67±0.11VS0.50±0.12）较B组增高(P0.05)但仍低于A组。B组豚鼠BALF及血中性粒细胞中KLF2/RelAmRNA比例均较A组降低（BALF 0.57±0.15VS1.17±0.21，血0.57±0.11VS2.14±0.23,P0.01)；B组血中性粒细胞中KLF2/RelA蛋白比例与A组相比也显著降低（0.65±0.17VS 1.54± 0.23,P0.01）,C组上述指标与B组相比明显好转（P0.01)。(8)相关分析显示中性粒细胞凋亡率与KLF2/RelA蛋白比值呈正相关（r=0.8826，P＜0.001)。结论:1.中性粒细胞性哮喘豚鼠中中性粒细胞凋亡率降低；2.KLF2/RelA比例失衡可能在中性粒细胞哮喘中性粒细胞凋亡延迟中发挥重要作用，是导致中性粒细胞增多的潜在因素。3.KLF2与RelA对中性粒细胞凋亡的调节并不是通过Bcl-xl这条途径实现的。关键词:中性粒细胞性哮喘；豚鼠；凋亡；KLF2；RelA本研究受国家自然基金（编、湖南省科技计划项目（编号2010FJ6113、2012FJ3075）、湖南省卫生厅科研基金（编号B2011-104）资助。- 4-EnglishAbstractTheimpact of KLF2/RelAimbalanceon neutrophil apoptosisof neutrophilic as