klf2rela比例失衡对支气管哮喘患者中性粒细胞凋亡的影响研究word论文.docxVIP

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2018-02-08 发布于上海
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klf2rela比例失衡对支气管哮喘患者中性粒细胞凋亡的影响研究word论文

KLF2/RelA 比例失衡在支气管哮喘患者中性粒细胞凋亡中的作用研究研究生黄进导师朱黎明教授中文摘要目的：研究支气管哮喘患者中性粒细胞内是否存在KLF2/RelA比例失衡及与中性粒细胞凋亡的关系方法：收集健康正常人及轻、中、重度哮喘患者外周血，通过FICOLL淋巴细胞分离液分离中性粒细胞，利用流式细胞术检测中性粒细胞凋亡率，利用RT-PCR和Western-blot 分别检测KLF2、RelA 和Bcl-xlmRNA和蛋白的表达，利用免疫荧光检测KLF2 和RelA 在细胞内的表达及定位。结果：1中性粒细胞的分离与纯度鉴定成功分离外周血中性粒细胞，经Wright-Giemsa染色鉴定后，中性粒细胞纯度达到95%以上；2哮喘患者中性粒细胞凋亡率变化健康对照组、轻、中、重度哮喘组中性粒细胞凋亡率（5.36±0.57、4.45±0.76、2.10±0.25、1.81±0.67）呈降低趋势，健康对照组、轻、中度哮喘组间两两比较，差异均存在统计学差异（P＜0.01），健康对照组、轻度哮喘组与重度哮喘组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）,中度哮喘组与重度哮喘组之间比较，差异无统计学意义（P 0.05）。3哮喘患者KLF2mRNA 和蛋白表达变化及与凋亡的关系1）KLF2mRNA相对表达量：RT-PCR检测KLF2mRNA在各组的表达后发现轻、中、重度哮喘组（0.47±0.11、0.75±0.13、1.17±0.28）呈上升趋势，轻度哮喘组和中度哮喘组比较差异均有统计学意义（P＜0.01），中、重度哮喘组间比较差异差异也有统计学意义（P＜0.01），中、重度哮喘组与健康志愿者组- 2-（1.52±0.37）比较，差异均有统计学意义（P＜0.01），重度哮喘组与健康志愿者组（1.52±0.37）比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）如表3，图3；2）KLF2 蛋白相对表达量：Western-blot 检测KLF2 蛋白在各组的表达后发现轻、中、重度哮喘组KLF2 蛋白相对表达量（0.050±0.014、0.066±0.025、0.091±0.023）呈增加趋势，轻度哮喘组和中度哮喘组比较差异均有统计学意义（P＜0.05），中、重度哮喘组间比较差异差异也有统计学意义（P＜0.01），轻、中度哮喘组与健康志愿者（0.124±0.021）比较均减小，差异均有统计学意义（P＜0.01），重度哮喘组与健康志愿者组（1.52±0.37）比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）如表3，图4；3）KLF2 核/浆平均光密度值：免疫荧光检测KLF2 在中性粒细胞内的表达及定位，采用Image-ProPlus6.0检测核/浆平均光密度值发现轻、中、重度哮喘组KLF2核/浆平均光密度值（0.33±0.10、0.58±0.14、0.72±0.15）呈逐渐增加的趋势，轻度哮喘组和中度哮喘组比较差异均有统计学意义（P＜0.01），中、重度哮喘组间比较差异差异也有统计学意义（P＜0.05），轻、中、重度哮喘与健康志愿者组（0.14±0.04）比较，差异均有统计学意义（P＜0.01），如表3，图5；4）中性粒细胞凋亡率与KLF2 蛋白表达做Pearson 相关性分析（r=0.1208，P0.05），提示无相关性；5）中性粒细胞凋亡率与中性粒细胞内KLF2核/浆平均吸光度值做Pearson相关性分析（r=-0.7754，P＜0.001），提示两者之间呈负相关。4哮喘患者RelAmRNA 和蛋白表达变化及与凋亡的关系1）RelAmRNA 相对表达：正常对照组、轻、中、重度哮喘组RelAmRNA 相对表达量（0.08±0.07、1.11±0.44、2.33±0.56、2.65±0.44）呈上升趋势，正常对照组、轻、中度哮喘组间两两比较，差异均存在统计学差异（P＜0.01），健康对照组、轻度哮喘组与重度哮喘组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）,中度哮喘组与重度哮喘组之间比较，差异无统计学意义（P0.05）；2）RelA 蛋白相对表达：对照组、轻、中、重度哮喘组RelA 蛋白相对表达量（0.039±0.024、0.092±0.046、0.187±0.045、0.201±0.058）呈上升趋势，正常对照组、轻、中度哮喘组间两两比较，差异均有存在统计学差异（P＜0.01），- 3-对照组、轻度哮喘组与重度哮喘组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）,中度哮喘组与重度哮喘组之间比较，差异无统计学意义（P0.05）；3）RelA 核/浆平均光密度值：正常对照组、轻、中、重度哮喘组RelA 核/ 浆平均光密度值（0.09±0.04、0.28±0.13、0.63±0.26、0.74±0.24）呈上升趋势，正常对照组、轻、中度哮喘组间两两比较，差异均有存在统计学差异（P＜0.01