ly294002联合奈达铂阻断pi3kakt通路对宫颈癌hela细胞体外生长的影响word论文.docx

1LY294002 联合奈达铂阻断 PI3K/Akt 通路对宫颈癌 HeLa细胞体外生长的影响研究生：谢博超导师：陈忠东 教授中 文 摘 要目的：探讨 PI3K/Akt 特异性抑制剂 LY294002 与奈达铂(NDP)单独及联合应用 对宫颈癌 HeLa 细胞体外生长的影响以及 LY294002 对 NDP 的增敏作用，并初步 探讨其可能作用机制， 方法：（1）采用溴化四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定不同浓度的 LY294002 与 NDP 单独或联合应用对体外宫颈癌 HeLa 细胞的增殖抑制率。（2）Western blot 免疫印迹法检测 LY294002、NDP 单独或联合应用对体外宫颈癌 HeLa 细胞 Bcl-2、 Caspase-3、PI3K、磷酸化 PI3K（p-PI3K）、Akt 和磷酸化 Akt（p-Akt）蛋白的表 达和活性的影响。结果：（1）LY294002、NDP 均能抑制宫颈癌 HeLa 细胞生长，随着药物浓度 的增加，细胞抑制率明显增加，P0.05,差异具有统计学意义。每个药物浓度随 着作用时间的延长，细胞抑制率逐渐增加，P0.05，差异具有统计学意义。（2） LY294002 可以增强 HeLa 细胞对 NDP 的敏感性。LY294002、NDP 单药应用的 细胞抑制率明显低于 LY294002 与 NDP 联合用药的抑制率，P0.05，差异具有统 计学意义。运用公式计算联合指数，提示联合作用时，具有协同性。（3）Western Blot 法分析结果表明：LY294002、NDP 均能下调 HeLa 细胞 Bcl-2 蛋白表达，同 时上调 Caspase-3 蛋白表达。且与 LY294002、NDP 单药应用比较，LY294002 与 NDP 联合应用 Bcl-2 蛋白的表达率有显著降低，而 Caspase-3 蛋白表达率显著增 高。（4）PI3K、Akt 蛋白在宫颈癌 HeLa 细胞内均有表达，LY294002 作用后能明 显抑制 HeLa 细胞内 p-PI3K、p-AKT 的蛋白表达。结论：（1）PI3K 特异性抑制剂 LY294002 及 NDP 均明显抑制宫颈癌 HeLa 细 胞的体外增殖，且这种作用呈浓度及时间依赖性。2（2）随着 LY294002 浓度的增加，HeLa 细胞对 NDP 的敏感性逐渐增强，提示 LY294002 对 NDP 具有协同作用，抑制细胞增殖，增加 HeLa 细胞对 NDP的敏感性。（3）LY294002 能抑制 HeLa 细胞增殖、诱导其凋亡，该作用可能与下调Bcl-2 蛋白表达，同时上调 Caspase-3 蛋白表达有关。（4）LY294002 可抑制 HeLa 细胞 p-PI3K、p-Akt 蛋白的表达，提示抑制PI3K/Akt 途径可能是 LY294002 发挥抗癌作用的重要机制。关键词：LY294002；PI3K/Akt；奈达铂；HeLa 细胞。3The effect induced by LY294002combined with Nedaplatinon human cervical carcinoma HeLa cell viablocking PI3K／Akt signal pathwayAbstractObjective: To Investigate The effect induced by LY294002 alone and combined withNedaplatin(NDP) on human cervical carcinoma HeLa cell LY294002 sensitization effect of NDP,and its possible mechanism in vitro。Methods:（1）Human cervical carcinoma HeLa cell were treated with LY294002， Nedaplatin(NDP) or LY294002 combined with Nedaplatin(NDP) in vitro .The cellgrowth was assessed by MTT assay. (2)The expressions of intracellular PI3k, p-PI3k，Akt, p-Akt, Bcl-2, and Caspase-3 proteins in human cervical carcinoma HeLa cell were analyzed by western blotting.Results: 1.LY294002,NDP can inhibit the growth of cervical cancer HeLa，with the