mbd2在急性白血病细胞中的表达及其沉默后对细胞生物学行为的影响word论文.docxVIP

中文摘要【目的】拟在蛋白水平和mRNA水平研究甲基化DNA结合蛋白2（MBD2）在不同白血病细胞系中的表达情况；进一步研究MBD2在初治急性白血病患者中的表达情况，并分析其与患者预后的相关性；研究MBD2 基因沉默后，对Jurkat细胞凋亡、细胞周期等生物学行为的影响。【方法】1. 从不同白血病细胞系中提取总蛋白，通过WesternBlot检测MBD2 的蛋白水平表达情况；从上述细胞系中提取总RNA，逆转录得cDNA后，通过RT-PCR检测MBD2 的mRNA水平表达情况。2.从初治的急性白血病患者骨髓中提取单个核细胞总RNA，逆转录得cDNA后，通过RT-PCR检测MBD2在mRNA水平的表达情况。通过查阅患者实验室检查资料，统计分析得出MBD2表达高低与其危险度分层有无关联，从而证实MBD2能否成为一项有意义的治疗靶点。选取Jurkat为目的细胞系，电转染siRNA沉默MBD2的表达，通过WesternBlot和RT-PCR检测其有沉默效应的时间点。4.收集电转染后72 小时的Jurkat 细胞，分别用AnnexinV-PI双染法，通过流式细胞术检测细胞凋亡情况；用PI染色检测细胞周期改变。【结果】1.通过对6种不同类型白血病细胞系的MBD2蛋白水平和mRNA水平的表达检测，发现其蛋白水平和RNA水平一致表达基本一致。2.通过对41例标本检测发现MBD2mRNA水平在不同白血病类型中表达高低不一致。与对照组相比，髓系白血病中MBD2mRNA表达未见明显升高，而淋巴细胞肿瘤中表达有所升高。通过亚组分析发现在高危B-ALL中表达明显升高。3.选取转染si-RNA后48小时、72小时、96小时三个时间点，收集Jurkat细胞通过WesternBlot和RT-PCR检测，发现其72 小时（蛋白水平和RNA水平）沉默效应最明显。4.收集转染后72小时的Jurkat细胞，检测细胞凋亡率轻微上调；对细胞周期有阻滞作用，将Jurkat 细胞阻断于G0/G1 期，导致S 期细胞数量下降。【结论】MBD2在初诊的高危B-ALL患者中呈高表达。沉默MBD2基因后，与对照组相比，对细胞凋亡无明显影响，对细胞周期有阻滞作用，将细胞周期阻断于G0/G1 期，影响细胞周期进展，该基因有可能成为抗肿瘤治疗的靶点。【关键词】甲基化DNA结合蛋白2（MBD2）；急性白血病；电转染；细胞周期；细胞凋亡【Object】AbstractResearchtheexpressionofthemethylationofDNAbindingprotein2(MBD2)in differentleukemiacelllines.Detectwhethertheaccordanceintheproteinlevelandthe mRNAlevel.Further,studytheexpressionofMBD2intheacuteleukemiapatientsand analyzeitscorrelationwiththeprognosisofpatients.DeterminewhetherMBD2 knockdown had anyeffect on the apoptosisand the cell cycle.【Method】Extracttotalproteinfromdifferentleukemiacelllines,thendetecttheprotein expressionlevelofMBD2byWesternBlot;TotalRNAextractedfromthecelllines, reversetranscription cDNA, MBD2 byrt-pcr detection ofmRNAexpression level.ExtracttotalRNAFromthebonemarrowmononuclearcellsoftheacuteleukemia patients.AfterreversetranscriptioncDNA,detectMBD2mRNAexpressionlevelby RT-PCR.Throughthereviewoflaboratorydata,statisticalanalysisMBD2highorlowrisk stratificationwithpresenceofcorrelation,whichconfirmMBD2becomeingasignificant therapeutictarget.SelectforthepurposeofJurkatcellline,electrictransfectionsiRNAsilencethe expressionofMBD2,todetectitssilenc