microrna-33模拟物及抑制物对hepg2细胞甘油三酯的影响及机制研究word论文.docxVIP

RISCSCAP SREBPTG TRL VLDL WBRNA-induced silencing complexSecurity content automation protocolSterolRegulatoryElementBinding ProteinTriglycerideTriglyceride-rich lipoproteinsVerylow-density lipoprotein Cholesterol Western Blotting/view/6872673.htmRNA 诱导沉默复合物固醇调节元件结合蛋白裂解 激活蛋白 固醇调节元件结合蛋白甘油三酯 富含甘油三酯脂蛋白 极低密度脂蛋白 蛋白质免疫印迹5MicroRNA-33 模拟物及抑制物对 hepG2 细胞甘油三酯的影响及机制研究硕士研究生：孙向科导师：卿国忠 教授中 文 摘 要目的：探讨 miR-33a 和 miR-33b 模拟物(mimics)及抑制物(inhibitors)对肝癌细胞（hepG2）甘油三酯（TriglycerideTG） 的影响及其作用机制的研究。方法：将实验分为五组：第一组 miR-33a mimic 组：加入 50nM miR-33a 模拟物； 第二组 miR-33a inhibitor 组：加入 100nM miR-33a 抑制物；第三组 miR-33b mimic 组：加入 50nM miRNA-33b 模拟物；第四组 miR-33b inhibitor 组：加入 100nM miRNA-33b 抑制物；第五组正常对照组：加入阴性对照 50nM microRNA。1. 在实验前用 Iipofectamin2000 转染不同浓度的阴性对照 microRNA，并用 荧光显微镜检测转染效率，确定转染 microRNA 的浓度。2、通过实时荧光定量 PCR(Real-time PCR RT-PCR)检测 hepG2 细胞中miR-33a 和 miR-33b 的表达情况。3. 通过检测细胞内甘油三酯含量，观察 miR-33a 和 miR-33b 对 hepG2 细胞 内甘油三酯含量的影响。4. Western blot 检测 5-磷酸腺苷激活的蛋白激酶（5-AMP Activated Protein Kinase AMPK）的表达情况。结果：1、转染 miR-33a mimics 组较对照组 miR-33a 含量升高，相反地转染 miR-33a inhabitors 组较对照组 miR-33a 含量降低，均有统计学意义。62、转染 miR-33b mimics 组较对照组 miR-33b 含量升高，相反地转染 miR-33binhibitors 组较对照组 miR-33b 含量降低，均有统计学意义3、分别转染 miR-33a 或 miR-33b mimics 组较对照组 TG 含量升高，而分别 转染 miR-33a 或 miR-33binhibitors 组较对照组 TG 含量降低，均有统计学意义。4、分别转染 miR-33a 或 miR-33bmimics 组较对照组 AMPK 表达水平降低， 相对应的分别转染 miR-33a 或 miR-33b inhibitors 组较对照组 AMPK 表达水平升 高，均有统计学意义。结论：在人肝癌细胞（hepG2）中，miR-33a和miR-33b可影响细胞内甘油三酯的水 平，其可能机制为靶向结合AMPK沉默其表达来调控细胞内甘油三酯的代谢。关键词：甘油三酯、microRNA-33、5-磷酸腺苷激活的蛋白激酶7Effect of microRNA-33 on triglyceride in hepG2 cells and the possible mechanisms investigation.AbstractObjective:To investigate down-regulation and up-regulationm miRNA-33 in hepG2 cells and its Effect on triglyceride and the possible mechanisms investigation.Methods:The hepG2 cells were transfected with microRN-33 mimics or inhibitors by Lipofectamine 2000. The expression of microR-33 gene in the cells and transltated cells was measured by real-time PCR. The TG content of hepG2 cells