mir-124通过靶向sphk1抑制胃癌生长侵袭及临床意义word论文.docxVIP

主要缩略词简表英文缩写英文全称中文全称EDTA ehtylenediaminetra-aceticacid 乙二胺四乙酸PBS phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液3’UTR3’untranslated region3’末端非翻译区BCABicinchoninicacide二喹啉甲酸DABDiaminobenzidin二氨基联苯胺DTT1,4-dithiothreitol1,4-二硫代苏糖醇HEHaematoxylin Eosin苏木素-伊红miRNAmicroRNA微小RNAMMP-2matrixmetalloproteinase2基质金属蛋白酶2MMP-9:matrixmetalloproteinase9基质金属蛋白酶9 PAGEspolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PMSFPhenymethansulfonyl fluride苯甲磺酸氟RISCRNAinduced silencingcomplex基因沉默复合物rmproundper minute转/分RT-PCRReversetranscriptionpolymerasechain reaction逆转录-聚合酶链式反应SDSSodium dodecyl sulfare十二烷基硫酸钠S-Pstreptavidin-peroxdase链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶SPHK1Sphingosine kinase1鞘氨醇激酶1TEMEDN,N, N，, N，-tetra methl EthylenediamineN,N, N，, N，-四甲基乙二胺TrisTrashydroxymethylamino methane三羟甲基氨基1miR-124通过靶向SPHK1抑制胃癌生长侵袭及临床意义硕士研究生：吕辉导师：罗招阳教授中文摘要目的：探讨miR-124（HomosapiensmiR-124）在胃癌MGC-803 细胞中生物学功能，以及在胃癌组织中的表达情况及临床意义。方法：选取胃癌组织标本176 例，癌旁组织作为正常对照，运用原位杂交检测胃癌组织及癌旁组织中miR-124 的表达水平；采用MTT、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测miR-124对人胃癌MGC-803细胞的生长、侵袭转移能力；运用Western blot、荧光素报告载体系统检测miR-124 直接调控的靶基因。结果：原位杂交结果显示，在176例胃癌组织中miR-124阳性表达率为18.18%显著低于癌旁对照组86.36%，差异有统计学意义(P0.01)；miR-124 的表达随着胃癌临床分期演进和浸润深度的增加而下调，各组比较差异均有统计学意义(P0.01)；miR-124 的表达与胃癌的分化程度相关，分化越差其表达越低，各组比较差异均有统计学意义(P0.01)；且有淋巴结转移的miR-124的表达显著低于无淋巴结转移组，差异有统计学意义(P0.05)。MTT结果显示，在转染miR-124mimics12h、24h、48h后OD值为(0.152±0.003)、(0.216±0.001)、(0.242±0.020)分别与对照组(0.316±0.010)、(0.429±0.002)、(0.517±0.007)比较，差异均有统计学意义（P0.05），且具有时间依赖性；细胞划痕实验显示，转染miR-124mimics12h、24h 后伤口愈合率分别为(0.243±0.005)、(0.341±0.026)与各自对照组(0.399±0.015)、(0.745±0.013)比能明显减缓MGC-803 细胞划痕伤口的愈合，差异有统计学意义(P0.05)；Transwell侵袭实验显示，转染miR-124 mimics 24h后穿过基底膜的细胞数为(43±5)与对照组(108±17)比能明显减缓MGC-803 细胞侵袭能力，差异有统计学意义(P0.05)；荧光素报告载体系统证实SPHK1（鞘氨醇激酶，Sphingosinekinase1,SPHK1）是miR-124 直接调控的靶基因；Western blot 结果显示，miR-124 可抑制SPHK1、MMP-2 和MMP-9 蛋白的表达。结论：1. miR-124在胃癌中表达下调，且其表达与胃癌的临床进展、分化程度及淋巴结转移有关。22. SPHK1 是miR-124 直接调控的靶基因。3. miR-124可通过下调SPHK1、MMP-2、MMP-9蛋白的表达，从而抑制胃癌MGC-803 细胞生长与侵袭能力。关键词：miR-124；鞘氨醇激酶1；胃癌；侵袭3miR-124inhibitsg