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2018-02-08 发布于上海
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mir-125b通过靶向抑制smad4表达调控骨髓间充质干细胞成骨分化word论文

向成骨细胞分化。关键词：成骨分化；骨髓间充质干细胞；miR-125b；Smad4。miR-125bregulatesosteogenicdifferentiationofhuman2bonemarrowmesenchymalstemcellsbytargetingSmad4AbstractObjective:ToinvestigatewhethermiR-125bregulatesbonemarrowmesenchymalstem cells (MSCs )osteogenicdifferentiationbytargetingSmad4.Methods:Thedensitygradientcentrifugationmethodwasusedtoisolateandculture thebonemarrowMSCs.ThecellsurfacemarkersofMSCswereanalyzedusingflow cytometry.Moreover,MSCsosteogenicdifferentiationwasdeterminedbyALP activityandtheexpressionlevelsofosteogenicspecificgenessuchasRUNX2and Osterix.MSCsweretransfectedwithmiR-125bmimicsorinhibitors,followedby inductionofosteogenicdifferentiation,thentheeffectsofmiR-125bonMSCs osteogenicdifferentiationwasdetermined.Smad43UTR-luciferasevectorwas constructedandcontransfectedwithmiR-125bintoCOS7cells.After48h, dual-luciferasereportergeneassaywasemployedtoexaminetheeffectofmiR-125b onluciferaseactivity.MSCs weretransfectedwithmiR-125b mimics and induced into osteogenicdifferentiation.Then,qRT-PCRandWesternblottingassayswereusedto detecttheexpressionsofSmad4mRNAandprotein.MSCswereinductedinto osteoblastsaftertransfecting withSmad4siRNA,andthe effectofSmad4knockdown onosteogenic differentiationwas observed.Results:ThecellsurfacemarkersCD34andCD45werenegativebutCD29and CD44positiveinMSCscells,whichisconsistentwithbonemarrowmesenchymal stemcellsinbasicfeatures.TheALPactivityandtheexpressionofosteogenic specificgenessuchasRUNX2andOsterixweremarklyupregulatedinMSCs culturedinosteogenicdifferentiationmedium,suggestingMSCscoulddifferentiate intoosteoblasts.OverexpressionofmiR-125binhibitsMSCsosteogenic differentiation,howevermiR-125bknockdownpromotedtheprocess.We demonstratedmiR-125bcouldbindtotheSmad43’UTRandinhibitedtheluciferase activity.Smad4mRNA andproteinexpressionsweresignificantlydown-regulatedin MSCsinductedintoosteogenicdifferentiationwhenmiR-125boverexpressed. The knocknownofSmad4couldsuppressALPactivityandtheexpressionsofRUNX23andOsterix,indicatingthatSmad4siRNAsim