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miR-124 抑制人结肠癌细胞生长与侵袭的机制研究硕士研究生：唐玉兰导师：梁庆模中文摘要目的：探讨miR-124（HomosapiensmiR-124）抑制人结肠癌SW620 细胞生长与侵袭的分子机制。方法：1. 转染miR-124 mimicss 于人结肠癌SW620细胞，转染后上调miR-124 表达的SW620细胞作为实验组；转染无关序列NC (negativecontrol) 于人结肠癌SW620 细胞，转染无关序列NC 的SW620细胞作为阴性对照组。2. 运用MTT、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测miR-124 对人结肠癌SW620 细胞的生长、侵袭转移能力。3. 用在线预测软件预测miR-124 靶基因及运用荧光素报告载体系统检验。4. 免疫细胞化学检测miR-124作用SW620细胞后对侵袭相关分子Vimentin与MMP-2（基质金属蛋白酶2）表达的差异。结果：MTT检测发现，实验组24h、48h、72h后光密度值（OD）分别为0.287±0.010、0.353±0.006、0.376±0.007，对照组24h、48h、72h 后OD值分别为0.436±0.014、0.551±0.015、0.642±0.021，两组比较差异有统计学意义（P0.05），结果提示miR-124过表达可抑制人结肠癌SW620细胞的生长。细胞划痕实验显示，实验组12h、24h 后划痕愈合率分别为0.265±0.007、0.377±0.015，对照组12h、24h 后划痕愈合率分别为0.406±0.025、0.782±0.016，实验组与对照组相比较，差异有统计学意义(P0.016)，结果提示miR-124 过表达能减缓SW620 细胞划痕的愈合。Transwell侵袭实验显示，转染24h 后，实验组穿过基底膜的细胞数为37±2.6，对照组穿过基底膜的细胞数为80±3.6，两组相比较，差异有统2计学意义(P0.05)，结果提示miR-124过表达能抑制SW620细胞侵袭能力。在线预测软件预测Vimentin是miR-124靶基因，荧光素报告载体系统证实Vimentin 是miR-124调控的靶基因。免疫细胞化学结果发现，在转染24h后实验组Vimentin和MMP-2平均光密度值分别为0.232±0.02、0.209±0.03，对照组Vimentin 和MMP-2 平均光密度值分别为0.609±0.02、0.724±0.01，两组相比较，差异均有统计学意义（P0.01），结果提示miR-124 过表达能抑制人结肠癌SW620 细胞中Vimentin 和MMP-2 蛋白的表达。结论：1. miR-124 过表达能抑制人结肠癌细胞生长侵袭。2. Vimentin 是miR-124 调控的靶基因。3. miR-124可能通过抑制Vimentin和MMP-2蛋白的表达，抑制人结肠癌SW620细胞生长、侵袭。关键词：miR-124；波形蛋白；结肠癌；生长与侵袭3ThemechanismofthemiR-124inhibitingthecoloncancercellsgrowthandinvasionAbstractObjective:ToinvestigatethemechanismofthemiR-124inhibitingthecolon cancer cells growth and invasion.Methods: CellgrowthwasevaluatedbyMTT.Cellinvasionpotentialwas evaluatedbyscratchtestandtranswellassay.miR-124targetingVimentinwas evaluatedbyluciferasereportervector.Immunocytochemistrywasusedtodetectedthe expressions of molecules with invasion.Results:miR-124couldinhibitedgrowthandproliferationofSW620cellsina time-dependentmanner.TheODvalueswere0.287±0.010,0.353±0.006and 0.376±0.007aftertansfectingmiR-124mimicsfor24,48and72hbyMTT.TheOD valueswere0.436±0.014,0.551±0.015,0.642±0.021aftertansfectingmiRNA negativecontrolfor24,48and72hbyMTT.It’scertifiedthatmiR-12