mir-133a与mir-326靶向abcc1对hepg2药物敏感性影响word论文.docxVIP

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2018-02-08 发布于上海
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mir-133a与mir-326靶向abcc1对hepg2药物敏感性影响word论文

英文缩写词索引英文缩写英文全称中文全称HCChepatocellularcarcinoma原发性肝细胞癌miRNAmicroRNA微小RNAMDRmultidrugresistance多药耐药UTRuntranslated region非翻译区ABCC1mutidrugresistance-associated protein 1多药耐药相关蛋白1 5-FU5-fluorouracil5-氟尿嘧啶ADMadriamycin阿霉素DDPcisplatin顺铂qRT-PCRquantitative real-time reversetranscription polymerase chain reaction实时定量逆转录聚合酶链反应MTTmethylthiazolyltetrazolium四甲基噻唑蓝PBSphosphate buffer solution磷酸盐缓冲液FBSfetal bovine serum胎牛血清DMSOdimethyl sulfoxide二甲基亚砜SDSsodium dodecyl sulfate十二烷基硫酸钠PMSFphenylmethanesulfonyl fluoride苯甲基磺酰氟1MiR-133a与miR-326靶向ABCC1对HepG2药物敏感性的影响研究生：马锦导师：雷小勇教授中文摘要目的：探讨miR-133a、miR-326 对肝癌HepG2细胞5-氟尿嘧啶、阿霉素和顺铂化疗药物敏感性的影响及作用机制。方法：生物信息学软件预测ABCC1基因3′UTR潜在的miRNA结合位点；双荧光素酶报告基因验证miR-133a、miR-326对ABCC1的靶向作用；实时定量RT-PCR检测miRNAs的转染效率及ABCC1 mRNA 表达水平；Western blot 检测ABCC1 蛋白表达水平；MTT法检测细胞对三种化疗药物的敏感性。结果：生物信息学预测软件显示ABCC1 基因3′UTR 存在一个miR-133a的结合位点和两个miR-326的结合位点。miR-133a的潜在保守结合位点位于ABCC1 3′UTR 366-372 nt，miR-326 的潜在结合位点位于ABCC1 3′UTR 3-9 nt 和1614-1621 nt。实时荧光定量RT-PCR结果显示，在miR-133a或miR-326mimics转染的HepG2细胞中，miR-133a或miR-326的表达水平显著升高（MOCK、NC、miR-133a 和miR-326 组的相对活性倍数分别为1、0.98、14.42 和14.83）；与NC 转染组相比，miR-133a或miR-326 mimics 转染组的ABCC1 表达水平显著降低（MOCK、NC、miR-133a和miR-326 组的相对活性倍数分别为1、1.03、0.69 和0.78）。Western blot 结果显示，与NC 转染组相比，miR-133a或miR-326 mimics 转染组的ABCC1蛋白表达水平显著降低（MOCK、NC、miR-133a和miR-326组的ABCC1/β-actin 灰度比值分别为2.25、2.18、0.85 和0.98）。MTT 检测结果显示，与未处理组细胞及NC 转染组相比，miR-133a 或miR-326 mimics 转染组的HepG2 细胞对三种化疗药物的敏感性均增强，其中25-FU处理的未转染组、NC组、miR-133a转染组和miR-326转染组的IC50分别为3026.7±236.7 μM、2074.8±173.1 μM、106.8±18.7 μM 和864.8±20.5 μM；ADM处理的未转染组、NC 组、miR-133a 转染组和miR-326 转染组的IC50 分别为0.86±0.15 μM、0.76±0.05 μM、0.49±0.12 μM和0.55±0.04 μM；DDP处理的未转染组、NC 组、miR-133a转染组和miR-326 转染组的IC50分别为21.70±5.28 μM、20.15±3.24 μM、14.00±2.32 μM 和16.19±3.18μM。双荧光素酶报告基因载体验证实验结果表明：与miRNA阴性对照(NC)+野生型ABCC1 3′UTR载体共转染组比较，miR-133amimics+野生型ABCC1 3′UTR 载体共转染组荧光素酶活性显著降低（将未转染组设定为1，NC组双荧光素酶活性倍数为1，miR-133a与野生型载体共转染组的双荧光素酶活性倍数为0.49），与NC+突变型ABCC1 3′UTR 载体共转染组比较，miR-133a mimics+突变型ABCC13′UTR载体共转染组荧光素酶活性倍数为0.98，无明显变化；miR-326 mimics+野生型ABCC13′U