mir-711对sgc-7901细胞周期g1期的影响及机制分析word论文.docxVIP

主要缩略词及英文索引(ABBREVIATIONS)英文简称3p英文全称short arm of chromosome 3中文全称3 号染色体短臂3’-UTRCCTCCthe region of3untranslatedChina Center forTypeCultureCollection3’端非转录区域中国典型培养物中心cDNAcomplementaryDNA双链互补脱氧核苷酸Ctcycle threshold value荧光循环阈值DEPCdiethyl pyrocarbonate焦磷酸二乙酯DMSO dimethylsulfoxide 二甲基亚砜DNA deoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸EDTA Ethylene DiamineTetraaceticAcid 乙二胺四乙酸miRNA microRNA 微小RNAmRNA messenger RNA 信使RNAODoptical density 吸光度PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应RASSF1ARNARas association domain family1ARibonucleic acidRAS 相关区域家族1A核糖核酸TrisTris(Hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷CDK4/6IODCyclin-dependent kinase4/6Integrated optical density周期素依赖性激酶4/6积分光密度qRT-PCRQuantificationalreal-timepolymerase chain reaction定量反转录聚合酶连锁反应1miR-711对SGC-7901细胞周期G1期的影响及机制研究硕士研究生：胡洪赛导师：廖爱军教授中文摘要目的：在前期研究的基础上，本课题主要研究miR-711对人胃癌细胞SGC-7901 细胞周期的影响。方法：体外培养SGC-7901 细胞，将miR-711 过表达载体（miR-711-mimics）、miR-711 抑制表达载体（miR-711-inhibitor）及空质粒（NC）转染至SGC-7901 细胞，即实验分为四组：miR-711-mimics、miR-711-inhibitor、空质粒组（NC）及空白对照组(Control)。采用实时荧光定量PCR方法验证转染后各组中miR-711的表达情况，通过MTT、流式细胞学检测，分析其与SGC-7901细胞周期的相关性，Western Blots 检测CyclinD1、CDK4 蛋白表达的变化。结果：将miR-711-mimics、miR-711-inhibitor及空质粒组（NC）转染至SGC-7901 细胞中，转染72小时后，通过荧光显微镜下计数，测得转染效率达75%以上，qRT-PCR检测实验组中miR-711的相对表达量，结果显示miR-711-mimics组、miR-711-inhibitors及NC组中的miR-711表达量分别是空白对照组的168.31倍、0.269倍、0.998 倍；MTT实验结果显示，miR-711-mimics 组细胞培养24h、48h、72h后，其细胞增殖抑制率随着时间的延长而增加（P0.05），miR-711-inhibitor 组其细胞增殖抑制率随着时间延长而降低（P0.05），NC 组与空白转染组比较无显著性差异（P0.05）；流式细胞术结果显示miR-711-mimics组与其他3 组相比较，转染72h 后的SGC-7901 细胞显著抑制在G1 期（P0.05）；WesternBlot检测显示miR-711-mimics 组CyclinD1、CDK4 的表达量与其余组比较明显降低（P0.05）。结论：miR-711 能抑制人胃癌SGC-7901 细胞增殖，其机制可能与下调CyclinD1、CDK4 的表达，使细胞周期阻滞在G1 期有关。关键词：miR-711；胃癌；细胞周期；CyclinD1；CDK