nbdrada-16对mc3t3-e1成骨分化影响的研究word论文.docxVIP

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2018-02-08 发布于上海
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nbdrada-16对mc3t3-e1成骨分化影响的研究word论文.docx

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nbdrada-16对mc3t3-e1成骨分化影响的研究word论文

摘要目的:小鼠前成骨细胞MC3T3-E1接种并培养于新型功能性自组装水凝胶NBD/RADA-16中，观察其生长状态，检测影响其分化的关键性蛋白，研究NBD/RADA-16 对MC3T3-E1增殖、分化能力的影响。方法:冰冻MC3T3-E1复苏并进行分离培养和传代，订购肽粉并制作形成新型功能性自组装水凝胶；挑选生长良好的二代细胞接种于水凝胶NBD/RADA-16进行3D细胞体外培养作为实验组；对照组为单纯RADA-16水凝胶，采用MTT检测法检测增值能力；酶标仪法检测碱性磷酸酶（alkalinephoaphatase，ALP）活性；21天诱导培养后进行细胞茜素红染色；采用WesternBlot鉴定细胞骨形成发生蛋白2（Bone morphogenetic protein2，BMP-2）的表达。结果：MC3T3-E1在NBD/RADA-16中生长状态良好。与对照组单纯RADA-16多肽水凝胶组相比，实验组成骨细胞增殖能力、ALP及矿化基质沉积表达上调，差异有统计学意义（P0.01），与RADA-16对照组相比，免疫印迹分析表明，成骨分化相关蛋白BMP-2 的表达明显上调。结论：NBD/RADA-16 利于MC3T3-E1的生长、增殖，同时促进成骨分化。关键词：NBD/RADA-16;成骨细胞;三维培养;成骨分化-1-AbstractObjective:MousepreosteoblastsMC3T3E1wereinoculatedandculturedinnew functionalself-assembled hydrogelNBD/RADA16toobservegrowthconditionofMC3T3 E1,detectkeyproteinsthataffectthedifferentiationofit,andsearchtheeffectof NBD/RADA16 on the abilityof proliferationanddifferentiationofMC3T3 E1.Methods:FrozenMC3T3-E1recovered,isolatedculturedandpassaged;ordered peptidepowderandformednewfunctionalself-assembledhydrogel;selectedwell-grown secondgenerationcellinoculationinhydrogelNBD/RADA-16and3Dcellsculturedin vitro.Thecontrolgroupisthepure RADA16hydrogel.Using MTTassaytodetect value-addedability;usingenzymestandardinstrumenttodetectalkalinephosphatase (alkalinephoaphatase,ALP)activity.21dayslater,aftertheinductiontrainingforcell alizarinredstaining.UsingWesternBlotappraisaltheexpressionofcellsBone morphogeneticprotein 2( BMP2).Results:MC3T3E1cellsgrewwellinNBD/RADA16peptidehydrogel;compared withthecontrolgrouppureRADA16peptidehydrogel,theexpressionofALPand mineralizedmatrixdepositionoftheexperimentalgroupincrease,thedifferencewas statisticallysignificant(P0.01),comparedwiththecontrolgroup,theWesternBlot analysisshowedthattheosteogenesisdifferentiationrelatedproteinexpressionofBMP-2 significantlyraised.Conclusion:NBD/RADA-16isconducivetothegrowthandproliferationof MC3T3-E1,whileit canpromoteosteoblast differentiation.Keywords: NBD/RADA16; osteoblast; threedimensional culture; osteogenic differentiation-2-前言牙槽骨[1]（al