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Neu-p11 通过上调 ATGL/HSL 表达改善胰岛素抵抗研究生：王平平导师：尹卫东 教授专业：病理学与病理生理学摘 要研究背景与目的以色列 Neurim Pharmaceuticals Ltd. 新近 研发 的 Neu-p11 ， 不 仅 是 褪黑素 （Melatonin，Mel）非选择性受体激动剂，而且具有与 Mel 类似的结构、相近的生物 学功能，两者均可显著抑制高糖高脂喂食大鼠体重的增加，减少脂肪细胞内甘油三酯（triglyceride，TG）蓄积，改善胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）。脂肪细胞内 TG含量增高与肥胖、胰岛素抵抗密切相关。作为经典脂肪分解酶的激素敏感脂肪酶（Hormone sensitive lipase，HSL）以及新近发现的脂肪组织甘油三酯酶(Adipose triglyceride lipase，ATGL)均是脂肪动员的关键酶，在脂肪组织 TG 分解代谢中发挥至 关重要的作用，且在鼠白色脂肪组织（white adipose tissue，WAT）促使 TG 水解的酶 中，95%以上均为 ATGL 与 HSL 发挥作用效应。另有实验证实：与胰岛素敏感组相 比，具有胰岛素抗性的细胞内 ATGL 与 HSL 的蛋白及 mRNA 水平均降低。本课题旨 在观察 Neu-p11 干预前后，高糖高胰岛素（high glucose and insulin，HGI）诱导的 3T3-L1 胰岛素抵抗脂肪细胞中 ATGL、HSL 蛋白表达的变化，对脂肪细胞内 TG 含量的影响 及两者的相关性，同时对产生上述效应的相关机制做深层次的探讨。方法（1）3T3-L1 脂肪细胞的诱导、分化：经典的“鸡尾酒”法（0.5mM IBMX，1μM DEX，10μg/ml INS）诱导 3T3-L1 前脂肪细胞分化为成熟的 3T3-L1 脂肪细胞，油红 O 染色法鉴定脂肪细胞形态及 3T3-L1 前脂肪细胞分化程度。（2）胰岛素抵抗模型的 制备：高糖高胰岛素孵育脂肪细胞 24 小时，葡萄糖氧化酶法间接检测糖消耗量验证-1-胰岛素抵抗细胞模型构建是否成功。（3）甘油三酯酶法及葡萄糖氧化酶——过氧化物酶法分别检测在 Luzindole 存在与否的前提下，Neu-p11 干预前后各组脂肪细胞中甘 油三酯沉积量及培养基内葡萄糖含量。（4）Western Blot 检测高糖高胰岛素作用前后 脂肪细胞 ATGL、HSL 蛋白的表达变化及 Neu-p11 干预（Luzindole 作用与否）对上 述蛋白表达的影响。结果3T3-L1 前脂肪细胞经“鸡尾酒”法诱导 10 天后，通过油红 O 染色可见 90%以上 细胞呈现明显的“戒环样”结构：细胞呈圆形，内含大量脂滴，且呈环形排列，即表 明已分化为典型的成熟脂肪细胞。实验结果显示：高糖高胰岛素联合作用 3T3-L1 脂 肪细胞 24h，明显降低细胞对葡萄糖的消耗量，成功诱导其发生胰岛素抵抗。另外， 实验结果还表明：与 Con 组相比，HGI 处理脂肪细胞导致细胞脂质积聚，TG 含量明 显增高，细胞内 ATGL、HSL 蛋白表达下调；经 Neu-p11 干预，与 Mel 具有类似效应， 可以明显促进胰岛素抵抗脂肪细胞对葡萄糖的摄取，抑制细胞内脂质积聚，降低细胞 内 TG 含量，上调 ATGL 及 HSL 蛋白表达，但并不影响 3T3-L1 脂肪细胞内 TG 水平； MT2 竞争性拮抗剂 Luzindole（LZD）预处理后，明显抑制了 Neu-p11/Mel 的上述效 应，且差异均具有统计学意义。结论Neu-p11 能显著抑制胰岛素抗性脂肪细胞脂质蓄积，降低其 TG 含量，改善 IR， 与其通过 MT2 受体依赖性方式上调 IR 脂肪细胞中 ATGL 和 HSL 蛋白表达相关。关键词Neu-p11；胰岛素抵抗；脂肪组织甘油三酯酶；激素敏感脂肪酶；甘油三酯-2-Neu-p11 ameliorates insulin resistance by enhancing ATGL/HSL and underlying mechanismsABSTRACTBackground and purposeNeu-p11, which was developed by Neurim Pharmaceuticals Ltd, not only was a melatonic agonist, but also had the same structure and biological function as melatonin. Both of them could inhibit the triglyceride accumulation. Increased triglyceride inten