nlrp3炎症复合体信号通路分子在幽门螺杆菌感染小鼠模型中表达的分析word论文.docxVIP

NLRNOD-likereceptorNOD样受体NLRP3NACTH domain-leucine-richrepeat-,and PYD-containingproteinNOD样受体蛋白3NODnucleotide bindingoligomerization domain核苷酸结合寡聚化结构域ODoptical density光密度PAGEpolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PAMPPathogen-associatedmolecularpattern病原相关分子模式PBSphosophate buffered saline磷酸盐缓冲液PCRPolymerase chain reaction聚合酶链式反应PMSFphenylmethyl sulfonylfluoride苯甲基磺酰氟化物PRRPattern recognition receptors模式识别受体r/minrevolutions per minute转/分RT-PCRReversetranscriptasePCR逆转录PCRSDSsodium dodecyl sulphate十二烷基硫酸钠TAETris/acetate/(buffer)Tris/乙酸电泳缓冲液TBSTris-buffered salineTris 缓冲盐溶液TEMEDN,N,N’,N’-tetramethylethylenediamineN,N,N′,N′-四甲基乙胺TrisTris-(hydroxymethyl) aminomethane三羟甲基氨基甲烷WHOWorld Health Organization世界卫生组织2NLRP3 炎症复合体信号通路分子在幽门螺杆菌感染小鼠模型中表达的研究硕士研究生：蒋建烨导师：张艳教授中文摘要目的：通过构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)感染C57BL/6小鼠动物模型，检测NLRP3炎症复合体信号通路相关分子在小鼠胃组织的表达情况，综合分析NLRP3炎症复合体信号通路及其分子在H. pylori感染引起的炎症反应中的作用。方法：将6-8 周龄C57BL/6小鼠随机分为3 组，即感染组、对照组和治疗组。感染组和对照组小鼠分别以H. pylori和PBS灌胃，1 次/48h，共5 次。4 周后，培养法鉴定H.pylori感染是否成功，并设立治疗组，采用三联疗法对小鼠进行治疗，为期1 周，治疗后4 周处死。对照组和感染组小鼠于感染后不同时间点处死，无菌取胃组织和血液进行进一步实验：(1)HE染色法鉴定感染小鼠胃组织炎症程度的变化；(2)RT-PCR检测小鼠胃组织中NLRP3(NACTH domain-leucine-rich repeat-,and PYD-containing protein, NLRP3)、ASC(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD, ASC)、caspase-1(cysteine aspartic acid specific protease-1, Caspase-1)、IL-1β、IL-18、IL-33 mRNA的表达情况；(3)ELISA检测小鼠血清中细胞因子IL-1β、IL-18、IL-33的含量；(4)Western blot检测小鼠胃组织中Caspase-1的表达情况。结果：(1)对照组小鼠胃组织正常，感染组小鼠胃组织炎症程度随感染时间的延长而不断加重，治疗组小鼠胃组织炎症程度明显减轻；3(2)感染组小鼠胃组织中NLRP3炎症复合体信号通路相关蛋白(NLRP3、ASC、caspase-1)和细胞因子(IL-1β、IL-18、IL-33)mRNA表达水平显著升高(P0.05)；(3)H. pylori感染的小鼠血清中IL-1β、IL-18、IL-33的表达均显著增高(P0.05), (4)H. pylori感染的小鼠胃组织中caspase-1的蛋白含量随感染时间延长而增加；(5)治疗组小鼠NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18、IL-33的表达量与治疗前相比有所下降。结论：(1)H. pylori感染后小鼠胃组织中NLRP3炎症复合体信号通路相关分子表达升高，表明H. pyori感染可以激活NLRP3炎症复合体信号通路。(2)H.pylori感染后小鼠的胃炎程度与NLRP3炎症复合体信号通路相关分子的表达呈正相关。关键词：幽门螺杆菌；NLRP3；ASC；caspase-1；IL-1β；IL-18；IL-33 本研究受以下课题资助：湖南省教育厅重点项目（11A103）4StudyofexpressionofNLRP3inflammas