notch信号通路在人角膜内皮细胞的表达及参与调控enmt的初步分析word论文.docxVIP

Notch 信号通路在人角膜内皮细胞的表达及参与调控EnMT的初步研究中文摘要目的：检测Notch信号通路受/配体、下游靶基因Hes1在正常人角膜内皮细胞（hCECs）的表达情况，并初步探索其参与调控角膜内皮细胞间质化（EnMT）的可能性，寻找调控角膜内皮细胞分化的新途径。方法：取正常人角膜供体材料，分离角膜后弹力层及内皮细胞层，予以4％多聚甲醛固定，通过wholemount免疫荧光染色检测Notch 信号通路受/配体、下游靶基因Hes1在正常人角膜内皮细胞的表达情况；分组培养人角膜内皮细胞，设置实验组（加入DAPT10uM）以及空白对照组（不加入DAPT），通过免疫荧光法及RT-PCR检测Notch下游靶基因Hes1与α-SMA在体外培养细胞中的表达情况，探索其表达及通路激活过程与角膜内皮细胞分化之间的关系。结果：（1）免疫荧光染色证实除Jagged1外，Notch信号通路受/配体在正常人角膜内皮层表达均呈阳性，但分布的情况不一；Notch信号靶基因Hes1在细胞胞浆表达。（2）体外培养人角膜内皮细胞中，DAPT（+）组细胞形态趋于六边形，免疫荧光染色检测α-SMA（-）；DAPT（-）组细胞呈成纤维细胞样外观，免疫荧光染色检测α-SMA（+）。（3）免疫荧光染色检测到DAPT（+）组细胞中Hes1 主要在细胞胞浆表达，DAPT（-）组细胞中Hes1 在细胞胞浆及胞核表达；RT-PCR检测Hes1 扩增条带，DAPT（+）组Hes1 条带较DAPT（-）组弱。结论:（1）Notch 信号通路存在于正常人角膜内皮细胞层中，且处于未激活状态；（2）体外培养人角膜内皮细胞时，Notch 信号通路被激活；（3）Notch 信号通路激活可能参与促进人角膜内皮细胞EnMT 过程。关键词：Notch 信号通路；角膜内皮细胞；分化2TheExpressionoftheNotchSignalingPathwayinHumanCornealEndothelialCellsandthePreliminaryResearchonitsParticipationintheRegulationofEnMTAbstractObjective:Toinvestigatetheexpressionofthereceptors/ligandsandthe downstreamtargetgenesnamedHes1oftheNotchsignalingpathwayinnormalhumancornealendothelialcells(hCECs),andexplorethepossibilityofregulating human corneal endothelial-to-mesenchymal transition(EnMT), then search a newmean to regulatecornealendothelial cells’differentiation.Methods:Takesomecornealmaterialsofnormoldonorsandseparateendothelial celllayerfromdescemetsmembrane,andfixedwith4%paraformaldehyde. WholemountImmunocytochemistrywasusedtoexaminereceptors/ligandsofthe Notchsignalingpathway,andtheexpressionofdownstreamtargetgenesnamed Hes1inhumancornealendothelialcells(hCECs).IdentifytheNotchsignaling pathwaysWhetherexistinhumancornealendothelialcells.cornealendothelialcells invitroculturewasgroupedintotwoparts,onewithDAPT10uMandanother without.DetecttheNotchdownstreamtargetgenesHes1andα-SMAexpressionin vitroculturecells byimmunofluorescence andRT-PCR andexplore the relationshipbetweenexpressionandactivationprocessandcornealendothelialcell differentiation.Result:ItwasconfirmedthatexceptforJagged1,theNotchsignal