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2018-02-08 发布于上海
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olomoucine抑制活化星形胶质细胞对brevican、neurocan表达影响word论文

Olomoucine抑制活化星形胶质细胞对brevican、neurocan表达的影响硕士研究生：侯超导师：武衡中文摘要目的：研究星形胶质细胞（astrocyte,Ast）活化后，短蛋白聚糖（brevican）、神经蛋白聚糖（neurocan）的表达变化，探讨brevican、neurocan在星形胶质细胞活化后的关键作用。方法：采用振荡培养法结合差速贴壁法分离纯化培养星形胶质细胞，将得到的第三代星形胶质细胞分为三组，分别为对照组、活化组与抑制组。用含10%FBS 的DMEM 培养基培养24 小时后的星形胶质细胞，为对照组细胞；用含10%FBS的DMEM培养基培养24 小时后的星形胶质细胞中加入20ng/ml 睫状神经营养因子，为活化组细胞；用20ng/ml 睫状神经营养因子加入含10%FBS的DMEM培养基培养24小时后，再加入溶于DMSO的100umol/LOlomoucine，为抑制组细胞。通过免疫荧光化学法观察各组细胞在形态上的变化。分别在12、24和48小时，应用双位点夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组细胞上清液中brevican、neurocan 含量变化，半定量RT-PCR 法分析各组细胞间胶原纤维酸性蛋白(glial fibrillaryacidicprotein,GFAP)及brevican mRNA、neurocan mRNA 的表达变化。结果：(1)与对照组相比，活化后的星形胶质细胞，数量明显增多，胞体变大，突起增加延长，交织成网状。上清液中brevican、neurocan 含量在12、24、48小时随着时间的延长逐渐增加，与对照组比较有显著差异（p＜0.05）。GFAP mRNA，brevican mRNA、neurocan mRNA 的表达在12、24、48小时随着时间的延长也出现明显增高，与对照组比较有显著差异（p＜0.05）。(2)应用Olomoucine干预后的抑制组与活化组相比，星形胶质细胞数量不再增多，胞体变小，突起减少缩短，星形胶质细胞活化被抑制。上清液中brevican、neurocan含量在12、24、48小时随着时间的延长逐渐降低，与活化组比较有显著差2异（p＜0.05）。GFAPmRNA、brevican mRNA、neurocan mRNA 的表达在12、24、48小时随着时间的延长逐渐下调，与活化组比较有显著差异（p＜0.05）。结论：1.活化后的星形胶质细胞中brevican、neurocan表达明显上调；2. Olomoucine通过抑制星形胶质细胞活化，可使neurocan、brevican表达相应下调。关键词：星形胶质细胞活化；胶原纤维酸性蛋白；Olomoucine；短蛋白聚糖；神经蛋白聚糖3ExpressionofbrevicanandneurocaninactivatedastrocytesbytheeffectofolomoucinAbstractObjectiveTo studythe expression ofbrevican and neurocan in activated astrocytes by the effect of olomoucin,and elucidatetheroleof them in activated astrocytes .MethodsAstrocyteswereseparatedandpurifiedbyshakingculturemethodcombined withdifferentialadhesionmethod,thenthethirdgenerationofastrocyteswereusedto subsequentexperimentanddividedintothreegroups,respectivelyforthecontrolgroup, activationgroupandinhibitiongroup.Astrocytesinthecontrolgroupwerecultured with10%FBSDMEMculturemedium,intheactivationgroupwereco-culturedwith20 ng/mlciliaryneurotrophicfactor(CNTF),andintheinhibitiongroupwereincubated100 μmol/Lolomoucine.Cellmorphologywasexaminedusingimmunocytochemistry.Three groupsofcellsbydifferentconditionsdealwith12,24and48hourslater,thecontentof brevicanand