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OSTP 增强紫杉醇诱导卵巢癌 A2780 细胞凋亡作用及其机制的研究研究生：卢雪琳导师：梁晓秋 教授中文摘要目的： 前期工作中我们首次筛选和鉴定出卵巢癌特异性结合肽（Ovarian cancer specific targeting peptide, OSTP），本实验进一步研究 OSTP 联合紫杉醇对卵巢癌 A2780 细胞生长和凋亡的影响及其机制。将对探讨和开发 OSTP 作为靶向化疗增 敏剂治疗卵巢癌奠定实验基础。方法： 体外培养卵巢癌 A2780 细胞，随机分为溶剂对照组（1640 和 DMSO 组）、 OSTP 组、紫杉醇组和 OSTP 联合紫杉醇组；采用四甲基偶氮唑盐（MTT 法）检 测 OSTP 对 A2780 细胞生长的影响及其 IC50 值；用 Annexin-V-FITC 和 PI 双染 法标记 A2780 细胞，应用流式细胞术检测细胞凋亡情况；通过磷酸化蛋白芯片 检测信号通路中蛋白的磷酸化水平变化情况；并用 Western Blot 实验进一步研究 信号通路中磷酸化蛋白的表达情况。结果： MTT 法检测结果显示：不同浓度(0.01、0.1、1、10、100umol/L) 的 OSTP 作用于卵巢癌 A2780 细胞时，其抑制率分别是 27.36%、32.68%、36.08%、40.77%、 57.32% 。 与 对 照 组 相 比 差 异 有 统 计 学 意 义 (P0.01) ， OSTP 的 IC50 值为 78.18umol/L。应用流式细胞技术检测细胞凋亡发现：不同浓度的 OSTP（20、40、80、160、320umol/L）对 A2780 细胞的凋亡率分别为 7.88%、8.35%、8.73%、9.39%、10.68%，与对照组相比差异有统计学意义（P0.01），提示 OSTP 可诱导 细胞凋亡，凋亡作用不是很强。OSTP 和紫杉醇联合应用，即分别在 OSTP80umol/L 0h、3h、6h、12h 后再加紫杉醇 10umol/L 作用于卵巢癌 A2780 细胞 48h，结果 发现细胞凋亡率分别是 39.40%、53.09%、48.18%和 45.62%，均高于 OSTP 和紫 杉醇单独用药及两者的凋亡率相加值，且差异有统计学意义(P0.001)，提示1OSTP 能增强紫杉醇诱导卵巢癌 A2780 细胞凋亡的作用。磷酸化蛋白芯片检测OSTP 联合紫杉醇诱导卵巢癌 A2780 细胞凋亡中蛋白磷酸化水平的情况。共筛选 出 42 个差异磷酸化位点，31 个差异蛋白。其中有 11 个蛋白的磷酸化水平上调， 23 个蛋白的磷酸化水平下调。Western Blot 进一步研究了其中 PI3K/Akt 信号通路 的两个差异磷酸化蛋白(FoxO1/3/4、14-3-3zeta/delta)的表达情况，结果显示，与 对照组相比，OSTP 组、紫杉醇组 FoxO1/3/4 磷酸化蛋白表达水平降低（P0.01）； 与 OSTP 组、紫杉醇组相比，联合用药组中的 FoxO1/3/4 磷酸化蛋白表达水平降 低（P0.01），差异均具有统计学意义。与对照组相比，OSTP 组、紫杉醇组 14-3-3 zeta/delta 磷酸化蛋白表达水平降低（P0.01）；与 OSTP 组、紫杉醇组相比，联 合用药组中的 14-3-3 zeta/delta 磷酸化蛋白表达水平降低（P0.01）；差异均具有 统计学意义。结论：1. OSTP 能增强紫杉醇诱导卵巢癌 A2780 细胞凋亡的作用。2. OSTP 增强紫杉醇诱导卵巢癌 A2780 细胞凋亡作用，其机制可能与 PI3K/Akt 信号通路中的关键蛋白 FoxO1/3/4 和 14-3-3zeta/ delta 磷酸化蛋白表达降低有 关。关键词：卵巢癌 A2780 细胞；OSTP；紫杉醇；细胞凋亡；磷酸化蛋白芯片2OSTP enhances paclitaxel-induced apoptosis on the ovarian cancer A2780 cellsAbstractObjective: It shows that the ovarian cancer specific targeting peptide (OSTP) has been firstly screened and identified in the preliminary work. The purpose of this study is to investigate further the effect of OSTP combined with paclitaxel on the growth and apoptosis of ovarian cancer A2780 cells. For